to ໃຊ້ງ່າຍ: ຊຸດນີ້ໃຫ້ມາເປັນ 2 × premix, ແລະ PCR ສາມາດປະຕິບັດໄດ້ໂດຍການເພີ່ມແມ່ແບບແລະ primers ໃສ່.
f ຄວາມຊື່ສັດສູງ: ຄວາມສັດຊື່ແມ່ນ 50 ເທົ່າຂອງ Taq polymerase.
specific ຄວາມລະອຽດສູງ: ປະສິດທິພາບການເລີ່ມຕົ້ນທີ່ດີເລີດເພື່ອຮັບປະກັນຄວາມສະເພາະຂອງຜະລິດຕະພັນ.
ampl ການຂະຫຍາຍຕົວຢ່າງໄວ: ຄວາມໄວຂະຫຍາຍສາມາດບັນລຸ 10-15 ວິນາທີ/kb.
ext ການຂະຫຍາຍທີ່ເຂັ້ມແຂງ: ສາມາດຂະຫຍາຍຊິ້ນ DNA ໄດ້ເຖິງ 20 kb.
ability ໃຊ້ໄດ້ຢ່າງກ້ວາງຂວາງ: ຊຸດນີ້ບັນຈຸມີ PCR Enhancer ແລະເsuitableາະສົມສໍາລັບການຂະຫຍາຍ GC ສູງແລະແມ່ແບບທີ່ຊັບຊ້ອນ.
ປະເພດ: DNA Polymerase ຄວາມຊື່ສັດສູງ
ຄວາມໄວການຂະຫຍາຍ: 10-15 ວິນາທີ/kb
ຂະ ໜາດ ຊິ້ນສ່ວນ: <20kb
ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ: ການຂະຫຍາຍ PCR ທີ່ມີຄວາມຊື່ສັດສູງ, ການຂະຫຍາຍພັນທຸກໍາຂອງເຊື້ອ, ການຂະຫຍາຍແມ່ແບບ GC ສູງ, ການສ້າງກຸ່ມພັນທຸກໍາທີ່ສັບສົນ, ການຂະຫຍາຍຄວາມຊື່ສັດສູງ cDNA, ການກວດຫາ SNP, ການປ່ຽນແປງສະເພາະຂອງສະຖານທີ່, ແລະອື່ນ.
ຜົນຜະລິດການສະກັດເອົາ DNA ຈາກເນື້ອເຍື່ອພືດຕ່າງ Various:
Noteາຍເຫດ: ຜົນຜະລິດ DNA ແມ່ນຂື້ນກັບປະເພດຕົວຢ່າງ. ວັດສະດຸທັງaboveົດຂ້າງເທິງແມ່ນມາຈາກໃບອ່ອນ.
ຜະລິດຕະພັນທັງຫມົດສາມາດໄດ້ຮັບການປັບແຕ່ງສໍາລັບ ODM/OEM. ສໍາລັບລາຍລະອຽດ,ກະລຸນາຄລິກບໍລິການລູກຄ້າ (ODM/OEM)
ເລີ່ມຮ້ອນເພື່ອຮັບປະກັນຄວາມສະເພາະຂອງຜະລິດຕະພັນ ຮູບທີ 1. Ultra HiFi ມີ ໜ້າ ທີ່ເລີ່ມຕົ້ນທີ່ດີເລີດເພື່ອຮັບປະກັນຄວາມສະເພາະຂອງຜະລິດຕະພັນເຄື່ອງຂະຫຍາຍສຽງ. ວິທີ beacons ໂມເລກຸນໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ (Ma et al., Anal Biochem, 2006). |
|
ຄວາມຊື່ສັດສູງທີ່ດີເລີດ, ສູງກວ່າ Taq Polymerase ເຖິງ 50 ເທົ່າ ຮູບ 2. ຄວາມຊື່ສັດຂອງ Ultra HiFi ແມ່ນສູງກ່ວາ 50 ເທົ່າຂອງ Taq polymerase ທົ່ວໄປ. ຄວາມຈົງຮັກພັກດີຂອງໂພລີເມີຣາຍຂອງ Taq polymerase (ໂດຍບໍ່ມີກິດຈະ ກຳ ແກ້ໄຂ) ຖືກໃຊ້ເປັນການອ້າງອີງ. |
|
ການຂະຫຍາຍສຽງຢ່າງໄວວາແລະຊິ້ນສ່ວນຍາວ long ສາມາດຂະຫຍາຍອອກໄດ້ໄວ ຮູບ 3. Ultra HiFi ສາມາດຂະຫຍາຍໄດ້ສູງສຸດ 5 ວິນາທີ/kb ສໍາລັບຊິ້ນສ່ວນທີ່ນ້ອຍກວ່າ 4 kb. ສໍາລັບຊິ້ນຍາວ, ເວລາຂະຫຍາຍສຽງສາມາດຂະຫຍາຍອອກໄດ້ຢ່າງເາະສົມ. ສຳ ລັບຊິ້ນສ່ວນທີ່ຫຼາຍກວ່າ 15 kb, ຄວາມໄວໃນຂອບເຂດສາມາດສູງເຖິງ 30 ວິນາທີ/kb. M: ເຄື່ອງTIາຍ TIANGEN D15000 |
|
ຄວາມເປັນເອກະພາບທີ່ເຂັ້ມແຂງແລະມີຄວາມສະເພາະເຈາະຈົງສູງ, ອ່ານງ່າຍ GC ສູງແລະຊິ້ນສ່ວນຍາວ long ຈາກແຫຼ່ງຕ່າງ different ຮູບທີ 4. Ultra HiFi ມີຄວາມສະເພາະສູງເພື່ອຮັບປະກັນອັດຕາຜົນສໍາເລັດຂອງການຂະຫຍາຍແລະປະລິມານຜະລິດຕະພັນສໍາລັບແມ່ແບບປະເພດຕ່າງ different. A. ຜົນການຂະຫຍາຍ Ultra HiFi B. ຜົນການຂະຫຍາຍ enzyme Hi-Fi ຂອງ Supplier K C. ຜົນການຂະຫຍາຍ enzyme Hi-Fi ຂອງ Supplier N M: ເຄື່ອງTIາຍ TIANGEN D15000 ເລນ 1-5. ຜົນການຂະຫຍາຍຕົວຂອງແມ່ແບບທີ່ມີຄວາມຍາວແຕກຕ່າງກັນ: 1. 750 bp; 2. 1 ກບີ; 3. 2 ກບີ; 4. 4 ກບີ; 5. 6 ກບີ ເລນ 6. ຜົນການຂະຫຍາຍຂອງແມ່ແບບ GC ສູງ: 1915 bp (GC%: 70%); ຖະ ໜົນ 7-11. ຜົນການຂະຫຍາຍແມ່ແບບ 2 kb ຈາກ genome ຕ່າງ various: 7. ໜູ; 8. ເຂົ້າ; 9. ເຂົ້າສາລີ; 10. ສາລີ; 11. ເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ; ເລນ 12-14. ຜົນການຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນຍາວ 8 kb: 12. ເຂົ້າ; 13. ສາລີ; |
ແມ່ແບບ A-1
template ແມ່ແບບປະກອບດ້ວຍສິ່ງປົນເປື້ອນທາດໂປຼຕີນຫຼືຕົວຍັບຍັ້ງ Taq, ແລະອື່ນ — —— ເຮັດຄວາມສະອາດແມ່ແບບ DNA, ກຳ ຈັດສິ່ງເປິເປື້ອນຂອງໂປຣຕີນຫຼືສະກັດເອົາແມ່ແບບ DNA ອອກພ້ອມກັບຊຸດເຄື່ອງກັ່ນຕອງ.
■ການປະຕິເສດແມ່ແບບບໍ່ສົມບູນແບບ - ເພີ່ມອຸນຫະພູມທີ່ມີຄວາມບໍ່ສົມດຸນຢ່າງເiatelyາະສົມແລະຍືດເວລາຂອງການເຮັດໃຫ້ມີການຄໍ້າປະກັນໄດ້ຢ່າງເາະສົມ.
rad ການເສື່ອມສະພາບຂອງແມ່ແບບ —— ກະກຽມແມ່ແບບຄືນໃ່.
A-2 Primer
quality ຄຸນນະພາບທີ່ບໍ່ດີຂອງ primers —— ສັງເຄາະສີ primer ຄືນໃ່.
rad ການເສື່ອມປະສິດທິພາບຂອງ primer —— ລວບລວມເອົາ primers ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມສູງໃສ່ໃນປະລິມານ ໜ້ອຍ ເພື່ອຮັກສາ. ຫຼີກເວັ້ນການແຊ່ແຂງຫຼາຍ tha ແລະການລະລາຍຫຼືການເກັບຮັກສາໄວ້ໃນໄລຍະຍາວ 4 ° C.
design ການອອກແບບ primers ບໍ່ເperາະສົມ (ຕົວຢ່າງຄວາມຍາວຂອງ primer ບໍ່ພຽງພໍ, dimer ສ້າງຂຶ້ນລະຫວ່າງ primers, ແລະອື່ນ)) -ການອອກແບບ primers ຄືນໃavoid່ (ຫຼີກເວັ້ນການສ້າງ primer dimer ແລະໂຄງສ້າງຂັ້ນສອງ).
A-3 ມກ2+ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ
g ມກ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຕໍ່າເກີນໄປ - ເພີ່ມປະລິມານ mg ຢ່າງເາະສົມ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ: ເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງ Mg2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນໂດຍຊຸດປະຕິກິລິຍາຈາກ 1 mM ຫາ 3 mM ໂດຍມີໄລຍະຫ່າງ 0.5 mM ເພື່ອກໍານົດ Mg ທີ່ດີທີ່ສຸດ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງແຕ່ລະແມ່ແບບແລະ primer.
A-4 ອຸນຫະພູມອ່ອນເພຍ
temperature ອຸນຫະພູມໃນການຫລອມສູງສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ການຜູກມັດຮອງພື້ນແລະແມ່ແບບ. —— ຫຼຸດອຸນຫະພູມໃນການຫຼອມແລະປັບສະພາບໃຫ້ດີທີ່ສຸດດ້ວຍການໄລ່ສີ 2 ອົງສາ.
A-5 ເວລາຂະຫຍາຍ
time ເວລາຂະຫຍາຍສັ້ນ - ເພີ່ມເວລາການຂະຫຍາຍ.
ປະກົດການ: ຕົວຢ່າງເຊີງລົບຍັງສະແດງໃຫ້ເຫັນແຖບ ລຳ ດັບເປົ້າາຍ.
A-1 ການປົນເປື້ອນຂອງ PCR
■ຂ້າມການປົນເປື້ອນຂອງລໍາດັບເປົ້າorາຍຫຼືຜະລິດຕະພັນການຂະຫຍາຍ - ລະມັດລະວັງບໍ່ໃຫ້ທໍ່ສົ່ງນໍ້າທີ່ມີລໍາດັບເປົ້າinາຍຢູ່ໃນຕົວຢ່າງທາງລົບຫຼືເຮັດໃຫ້ມັນໄຫຼອອກຈາກທໍ່ centrifuge. ນ້ ຳ ຢາຫຼືອຸປະກອນຄວນໄດ້ຮັບການອັດຕະໂນມັດເພື່ອ ກຳ ຈັດກົດນິວເຄຼຍທີ່ມີຢູ່, ແລະການມີການປົນເປື້ອນຄວນຖືກ ກຳ ນົດຜ່ານການທົດລອງຄວບຄຸມທາງລົບ.
ination ການປົນເປື້ອນສານ Reagent —— ວາງນໍ້າຢາແລະເກັບຮັກສາໄວ້ໃນອຸນຫະພູມຕໍ່າ.
A-2 Primer
g ມກ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຕໍ່າເກີນໄປ - ເພີ່ມປະລິມານ mg ຢ່າງເາະສົມ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ: ເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງ Mg2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນໂດຍຊຸດປະຕິກິລິຍາຈາກ 1 mM ຫາ 3 mM ໂດຍມີໄລຍະຫ່າງ 0.5 mM ເພື່ອກໍານົດ Mg ທີ່ດີທີ່ສຸດ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງແຕ່ລະແມ່ແບບແລະ primer.
design ການອອກແບບ primer ທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ, ແລະລໍາດັບເປົ້າhasາຍມີຄວາມຄ້າຍຄືກັນກັບລໍາດັບທີ່ບໍ່ແມ່ນເປົ້າາຍ. --- ການອອກແບບຄືນໃ່.
ປະກົດການ: ວົງຂະຫຍາຍສຽງ PCR ແມ່ນບໍ່ສອດຄ່ອງກັບຂະ ໜາດ ທີ່ຄາດໄວ້, ທັງໃຫຍ່ຫຼືນ້ອຍ, ຫຼືບາງຄັ້ງທັງສອງແຖບຂະຫຍາຍສຽງສະເພາະແລະວົງດົນຕີການຂະຫຍາຍທີ່ບໍ່ສະເພາະເກີດຂຶ້ນ.
A-1 Primer
■ຄວາມສະເພາະຂອງ primer ບໍ່ດີ
—— primer ອອກແບບໃ່.
concentration ຄວາມເຂັ້ມຂອງ primer ສູງເກີນໄປ —— ເພີ່ມອຸນຫະພູມ denaturation ຢ່າງຖືກຕ້ອງແລະຍືດເວລາການເຮັດໃຫ້ເປັນ denaturation ໄດ້ດົນ.
A-2 Mg2+ ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ
■ The Mg2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງເກີນໄປ —— ຫຼຸດຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ Mg2+ ຢ່າງເາະສົມ: ເພີ່ມປະລິມານ Mg ໃຫ້ເາະສົມ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນໂດຍຊຸດປະຕິກິລິຍາຈາກ 1 mM ຫາ 3 mM ໂດຍມີໄລຍະຫ່າງ 0.5 mM ເພື່ອກໍານົດ Mg ທີ່ດີທີ່ສຸດ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງແຕ່ລະແມ່ແບບແລະ primer.
A-3 Polymerase ຄວາມຮ້ອນທີ່ສຸດ
amount ປະລິມານເອນໄຊຫຼາຍເກີນໄປ - ຫຼຸດປະລິມານເອນໄຊລົງໄດ້ຢ່າງເatາະສົມໃນລະຫວ່າງ 0.5 U.
A-4 ອຸນຫະພູມອ່ອນເພຍ
temperature ອຸນຫະພູມໃນການຫຼໍ່ຫຼອມຕ່ ຳ ເກີນໄປ-ເພີ່ມອຸນຫະພູມໃນການຫຼໍ່ທີ່ເorາະສົມຫຼື ນຳ ໃຊ້ວິທີການຫຼອມທັງສອງຂັ້ນຕອນ.
ຮອບວຽນ A-5 PCR
cles ຮອບ PCR ຫຼາຍເກີນໄປ - ຫຼຸດຈໍານວນຂອງຮອບ PCR ລົງ.
A-1 Primer—— ຄວາມສະເພາະທີ່ບໍ່ດີ —— ອອກແບບ primer ໃ,່, ປ່ຽນຕໍາ ແໜ່ງ ແລະຄວາມຍາວຂອງ primer ເພື່ອເພີ່ມຄວາມສະເພາະຂອງມັນ; ຫຼືປະຕິບັດ PCR ທີ່ຕິດຢູ່.
ແມ່ແບບ A-2 DNA
—— ແມ່ແບບບໍ່ບໍລິສຸດ —— ເຮັດຄວາມສະອາດແມ່ແບບຫຼືສະກັດ DNA ດ້ວຍຊຸດເຄື່ອງເຮັດຄວາມສະອາດ.
A-3 ມກ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ
—— mg2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງເກີນໄປ - ຫຼຸດຜ່ອນ Mg ຢ່າງຖືກຕ້ອງ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ: ເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງ Mg2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນໂດຍຊຸດປະຕິກິລິຍາຈາກ 1 mM ຫາ 3 mM ໂດຍມີໄລຍະຫ່າງ 0.5 mM ເພື່ອກໍານົດ Mg ທີ່ດີທີ່ສຸດ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງແຕ່ລະແມ່ແບບແລະ primer.
A-4 dNTP
—— ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ dNTPs ສູງເກີນໄປ —— ຫຼຸດຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ dNTP ຢ່າງເາະສົມ
A-5 ອຸນຫະພູມອ່ອນເພຍ
—— ອຸນຫະພູມໃນການຫຼໍ່ຫຼອມຕໍ່າເກີນໄປ —— ເພີ່ມອຸນຫະພູມໃນການຫຼໍ່ທີ່ເroາະສົມ
A-6 ຮອບວຽນ
—— ຫຼາຍຮອບເກີນໄປ —— ເພີ່ມປະສິດທິພາບ ຈຳ ນວນຮອບວຽນ
ຂັ້ນຕອນທໍາອິດແມ່ນເລືອກ polymerase ທີ່ເາະສົມ. ປົກກະຕິ Taq polymerase ບໍ່ສາມາດກວດຄືນໄດ້ເນື່ອງຈາກຂາດກິດຈະກໍາ exonuclease 3'-5 ', ແລະຄວາມບໍ່ເຂົ້າກັນຈະຊ່ວຍຫຼຸດປະສິດທິພາບການຂະຫຍາຍຂອງຊິ້ນສ່ວນໄດ້ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ. ເພາະສະນັ້ນ, Taq polymerase ປົກກະຕິບໍ່ສາມາດຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນເປົ້າlargerາຍໃຫຍ່ກວ່າ 5 kb ໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບ. Taq polymerase ທີ່ມີການດັດແປງພິເສດຫຼື polymerase ຄວາມຊື່ສັດສູງອື່ນ other ຄວນຖືກເລືອກເພື່ອປັບປຸງປະສິດທິພາບການຂະຫຍາຍແລະຕອບສະ ໜອງ ກັບຄວາມຕ້ອງການຂອງການຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນທີ່ຍາວນານ. ນອກຈາກນັ້ນ, ການຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນທີ່ຍາວອອກຍັງຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການປັບປ່ຽນການອອກແບບເບື້ອງຕົ້ນທີ່ເ,າະສົມ, ເວລາທີ່ບໍ່ມີຕົວຕົນ, ເວລາຂະຫຍາຍ, pH ຂອງກັນຊົນ, ແລະອື່ນ Usually. ເພື່ອປ້ອງກັນຄວາມເສຍຫາຍຂອງແມ່ແບບ, ເວລາ denaturation ຢູ່ທີ່ 94 ° C ຄວນຈະຫຼຸດລົງເປັນ 30 ວິນາທີຫຼື ໜ້ອຍ ກ່ວາຕໍ່ຮອບ, ແລະເວລາທີ່ຈະເພີ່ມອຸນຫະພູມເປັນ 94 ° C ກ່ອນການຂະຫຍາຍຄວນ ໜ້ອຍ ກວ່າ 1 ນາທີ. ຍິ່ງໄປກວ່ານັ້ນ, ການຕັ້ງອຸນຫະພູມຂະຫຍາຍຢູ່ທີ່ປະມານ 68 ° C ແລະການອອກແບບເວລາຂະຫຍາຍຕາມອັດຕາ 1 kb/min ສາມາດຮັບປະກັນການຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນທີ່ຍາວອອກໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບ.
ອັດຕາຄວາມຜິດພາດຂອງການຂະຫຍາຍ PCR ສາມາດຫຼຸດລົງໄດ້ໂດຍການໃຊ້ DNA polymerases ຕ່າງ with ດ້ວຍຄວາມຊື່ສັດສູງ. ໃນບັນດາໂປຼຕີນທັງTaົດຂອງ Taq DNA ທີ່ພົບມາຮອດປະຈຸບັນ, ເອນໄຊ Pfu ມີອັດຕາຄວາມຜິດພາດຕໍ່າສຸດແລະຄວາມຊື່ສັດສູງສຸດ (ເບິ່ງຕາຕະລາງຄັດຕິດ). ນອກ ເໜືອ ໄປຈາກການຄັດເລືອກເອນໄຊ, ນັກຄົ້ນຄວ້າຍັງສາມາດຫຼຸດອັດຕາການກາຍພັນຂອງ PCR ຕື່ມອີກໂດຍການປັບປຸງເງື່ອນໄຂປະຕິກິລິຍາໃຫ້ດີທີ່ສຸດ, ລວມທັງການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງສ່ວນປະກອບຂອງສານກັນບູດ, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ polymerase ທີ່ມີຄວາມຮ້ອນທີ່ສຸດແລະການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງcycleາຍເລກຮອບວຽນ PCR.
ນັບຕັ້ງແຕ່ການສ້າງຕັ້ງ, ໂຮງງານຂອງພວກເຮົາໄດ້ພັດທະນາຜະລິດຕະພັນລະດັບໂລກອັນທໍາອິດໂດຍຍຶດັ້ນຫຼັກການ
ຂອງຄຸນນະພາບຄັ້ງທໍາອິດ. ຜະລິດຕະພັນຂອງພວກເຮົາໄດ້ຮັບຊື່ສຽງໂດ່ງດັງໃນອຸດສາຫະກໍາແລະເປັນທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ໃນບັນດາລູກຄ້າໃand່ແລະເກົ່າ.