ຊຸດ PCR ຫຼາຍອັນ
ຄຸນລັກສະນະ
specific ສະເພາະເຈາະຈົງສູງ: ເອນໄຊເລີ່ມແກ້ໄຂທາງເຄມີດ້ວຍເວລາກະຕຸ້ນເຖິງ 15 ນາທີເພື່ອຮັບປະກັນການຂະຫຍາຍສະເພາະຕົວສູງ.
sens ຄວາມອ່ອນໄຫວສູງ: ການຂະຫຍາຍສໍາເນົາຕໍ່າແລະການຂະຫຍາຍປະສິດທິພາບສູງຂອງ PCR ແບບຄູນ.
operation ການປະຕິບັດງ່າຍ■: ເອນໄຊບໍ່ໄດ້ໃຊ້ງານຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຕໍ່າແລະອຸນຫະພູມຫ້ອງ, ແລະນໍ້າຢາສາມາດກຽມໄວ້ໄດ້ທີ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງ.
ຄໍານິຍາມກິດຈະກໍາ
1 ໜ່ວຍ (U) ກິດຈະ ກຳ HotStart Taq DNA Polymerase ຖືກ ກຳ ນົດເປັນປະລິມານຂອງເອນໄຊທີ່ຕ້ອງການເພື່ອລວມເອົາ 10 nmol deoxynucleotides ເຂົ້າໄປໃນສານທີ່ບໍ່ສາມາດລະລາຍໃນກົດໄດ້ທີ່ 74 ℃ພາຍໃນ 30 ນາທີໂດຍໃຊ້ DNA ເຊື້ອອະສຸຈິ salmon ທີ່ເປີດໃຊ້ເປັນແມ່ແບບ/primer.
ພາລາມິເຕີເຕັກນິກຫຼັກ
ມັນມີກິດຈະກໍາ exonuclease 5′-3 and ແລະບໍ່ມີກິດຈະກໍາ exonuclease 3′-5 with ທີ່ມີສະເພາະທີ່ເຂັ້ມແຂງທີ່ສຸດ. ຈຸດສິ້ນສຸດ 3 of ຂອງຜະລິດຕະພັນ PCR ແມ່ນ A, ເຊິ່ງສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ໂດຍກົງສໍາລັບການ cloning TA.
ສະເປັກ
ປະເພດ: ສານ Polymerase HotStart DNA ດັດແກ້ດ້ວຍສານເຄມີ
ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ: ການທົດລອງ PCR ແບບ Multiplex, ການທົດລອງການກວດສອບຄວາມຈໍາເພາະສູງ, ການຂະຫຍາຍເຊື້ອສາຍທີ່ມີສໍາເນົາຕໍ່າ, ການຂະຫຍາຍ PCR ຂອງແມ່ແບບທີ່ມີໂຄງສ້າງທີ່ຊັບຊ້ອນ (ເຊັ່ນ: DNA ພັນທຸກໍາ, cDNA, ແລະອື່ນ)).
ຜະລິດຕະພັນທັງຫມົດສາມາດໄດ້ຮັບການປັບແຕ່ງສໍາລັບ ODM/OEM. ສໍາລັບລາຍລະອຽດ,ກະລຸນາຄລິກບໍລິການລູກຄ້າ (ODM/OEM)
  |
ໃຊ້ກໍາມະພັນຂອງມະນຸດເປັນແມ່ແບບເພື່ອຂະຫຍາຍ 7 ຊິ້ນສ່ວນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ (100 bp-1000 bp) ຫມາຍເຫດ: ①ການກໍານົດເວລາການຂະຫຍາຍສໍາລັບການຂະຫຍາຍຄວາມຍາວທີ່ແຕກຕ່າງກັນຢູ່ໃນຕົວຄູນ PCR: ສໍາລັບຊິ້ນສ່ວນທີ່ນ້ອຍກວ່າ 500 bp, ຂະຫຍາຍອອກໄປອີກ 60 ວິນາທີ; ສໍາລັບຊິ້ນສ່ວນ 500-1500 bp, ຂະຫຍາຍອອກໄປອີກ 90 ວິນາທີ; ສໍາລັບຊິ້ນສ່ວນຫຼາຍກວ່າ 2000 bp, ຂະຫຍາຍອອກໄປອີກ 120 ວິນາທີ. start ການເລີ່ມຮ້ອນຕ້ອງການຄວາມຮ້ອນທີ່ 95 ° C ເປັນເວລາ 15 ນາທີເພື່ອຮັບປະກັນການປ່ອຍກິດຈະກໍາຂອງເອນໄຊໃຫ້ພຽງພໍ. |
ແມ່ແບບ A-1
template ແມ່ແບບປະກອບດ້ວຍສິ່ງປົນເປື້ອນທາດໂປຼຕີນຫຼືຕົວຍັບຍັ້ງ Taq, ແລະອື່ນ — —— ເຮັດຄວາມສະອາດແມ່ແບບ DNA, ກຳ ຈັດສິ່ງເປິເປື້ອນຂອງໂປຣຕີນຫຼືສະກັດເອົາແມ່ແບບ DNA ອອກພ້ອມກັບຊຸດເຄື່ອງກັ່ນຕອງ.
■ການປະຕິເສດແມ່ແບບບໍ່ສົມບູນແບບ - ເພີ່ມອຸນຫະພູມທີ່ມີຄວາມບໍ່ສົມດຸນຢ່າງເiatelyາະສົມແລະຍືດເວລາຂອງການເຮັດໃຫ້ມີການຄໍ້າປະກັນໄດ້ຢ່າງເາະສົມ.
rad ການເສື່ອມສະພາບຂອງແມ່ແບບ —— ກະກຽມແມ່ແບບຄືນໃ່.
A-2 Primer
quality ຄຸນນະພາບທີ່ບໍ່ດີຂອງ primers —— ສັງເຄາະສີ primer ຄືນໃ່.
rad ການເສື່ອມປະສິດທິພາບຂອງ primer —— ລວບລວມເອົາ primers ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມສູງໃສ່ໃນປະລິມານ ໜ້ອຍ ເພື່ອຮັກສາ. ຫຼີກເວັ້ນການແຊ່ແຂງຫຼາຍ tha ແລະການລະລາຍຫຼືການເກັບຮັກສາໄວ້ໃນໄລຍະຍາວ 4 ° C.
design ການອອກແບບ primers ບໍ່ເperາະສົມ (ຕົວຢ່າງຄວາມຍາວຂອງ primer ບໍ່ພຽງພໍ, dimer ສ້າງຂຶ້ນລະຫວ່າງ primers, ແລະອື່ນ)) -ການອອກແບບ primers ຄືນໃavoid່ (ຫຼີກເວັ້ນການສ້າງ primer dimer ແລະໂຄງສ້າງຂັ້ນສອງ).
A-3 ມກ2+ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ
g ມກ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຕໍ່າເກີນໄປ - ເພີ່ມປະລິມານ mg ຢ່າງເາະສົມ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ: ເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງ Mg2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນໂດຍຊຸດປະຕິກິລິຍາຈາກ 1 mM ຫາ 3 mM ໂດຍມີໄລຍະຫ່າງ 0.5 mM ເພື່ອກໍານົດ Mg ທີ່ດີທີ່ສຸດ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງແຕ່ລະແມ່ແບບແລະ primer.
A-4 ອຸນຫະພູມອ່ອນເພຍ
temperature ອຸນຫະພູມໃນການຫລອມສູງສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ການຜູກມັດຮອງພື້ນແລະແມ່ແບບ. —— ຫຼຸດອຸນຫະພູມໃນການຫຼອມແລະປັບສະພາບໃຫ້ດີທີ່ສຸດດ້ວຍການໄລ່ສີ 2 ອົງສາ.
A-5 ເວລາຂະຫຍາຍ
time ເວລາຂະຫຍາຍສັ້ນ - ເພີ່ມເວລາການຂະຫຍາຍ.
ປະກົດການ: ຕົວຢ່າງເຊີງລົບຍັງສະແດງໃຫ້ເຫັນແຖບ ລຳ ດັບເປົ້າາຍ.
A-1 ການປົນເປື້ອນຂອງ PCR
■ຂ້າມການປົນເປື້ອນຂອງລໍາດັບເປົ້າorາຍຫຼືຜະລິດຕະພັນການຂະຫຍາຍ - ລະມັດລະວັງບໍ່ໃຫ້ທໍ່ສົ່ງນໍ້າທີ່ມີລໍາດັບເປົ້າinາຍຢູ່ໃນຕົວຢ່າງທາງລົບຫຼືເຮັດໃຫ້ມັນໄຫຼອອກຈາກທໍ່ centrifuge. ນ້ ຳ ຢາຫຼືອຸປະກອນຄວນໄດ້ຮັບການອັດຕະໂນມັດເພື່ອ ກຳ ຈັດກົດນິວເຄຼຍທີ່ມີຢູ່, ແລະການມີການປົນເປື້ອນຄວນຖືກ ກຳ ນົດຜ່ານການທົດລອງຄວບຄຸມທາງລົບ.
ination ການປົນເປື້ອນສານ Reagent —— ວາງນໍ້າຢາແລະເກັບຮັກສາໄວ້ໃນອຸນຫະພູມຕໍ່າ.
A-2 Primer
g ມກ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຕໍ່າເກີນໄປ - ເພີ່ມປະລິມານ mg ຢ່າງເາະສົມ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ: ເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງ Mg2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນໂດຍຊຸດປະຕິກິລິຍາຈາກ 1 mM ຫາ 3 mM ໂດຍມີໄລຍະຫ່າງ 0.5 mM ເພື່ອກໍານົດ Mg ທີ່ດີທີ່ສຸດ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງແຕ່ລະແມ່ແບບແລະ primer.
design ການອອກແບບ primer ທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ, ແລະລໍາດັບເປົ້າhasາຍມີຄວາມຄ້າຍຄືກັນກັບລໍາດັບທີ່ບໍ່ແມ່ນເປົ້າາຍ. --- ການອອກແບບຄືນໃ່.
ປະກົດການ: ວົງຂະຫຍາຍສຽງ PCR ແມ່ນບໍ່ສອດຄ່ອງກັບຂະ ໜາດ ທີ່ຄາດໄວ້, ທັງໃຫຍ່ຫຼືນ້ອຍ, ຫຼືບາງຄັ້ງທັງສອງແຖບຂະຫຍາຍສຽງສະເພາະແລະວົງດົນຕີການຂະຫຍາຍທີ່ບໍ່ສະເພາະເກີດຂຶ້ນ.
A-1 Primer
■ຄວາມສະເພາະຂອງ primer ບໍ່ດີ
—— primer ອອກແບບໃ່.
concentration ຄວາມເຂັ້ມຂອງ primer ສູງເກີນໄປ —— ເພີ່ມອຸນຫະພູມ denaturation ຢ່າງຖືກຕ້ອງແລະຍືດເວລາການເຮັດໃຫ້ເປັນ denaturation ໄດ້ດົນ.
A-2 Mg2+ ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ
■ The Mg2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງເກີນໄປ —— ຫຼຸດຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ Mg2+ ຢ່າງເາະສົມ: ເພີ່ມປະລິມານ Mg ໃຫ້ເາະສົມ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນໂດຍຊຸດປະຕິກິລິຍາຈາກ 1 mM ຫາ 3 mM ໂດຍມີໄລຍະຫ່າງ 0.5 mM ເພື່ອກໍານົດ Mg ທີ່ດີທີ່ສຸດ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງແຕ່ລະແມ່ແບບແລະ primer.
A-3 Polymerase ຄວາມຮ້ອນທີ່ສຸດ
amount ປະລິມານເອນໄຊຫຼາຍເກີນໄປ - ຫຼຸດປະລິມານເອນໄຊລົງໄດ້ຢ່າງເatາະສົມໃນລະຫວ່າງ 0.5 U.
A-4 ອຸນຫະພູມອ່ອນເພຍ
temperature ອຸນຫະພູມໃນການຫຼໍ່ຫຼອມຕ່ ຳ ເກີນໄປ-ເພີ່ມອຸນຫະພູມໃນການຫຼໍ່ທີ່ເorາະສົມຫຼື ນຳ ໃຊ້ວິທີການຫຼອມທັງສອງຂັ້ນຕອນ.
ຮອບວຽນ A-5 PCR
cles ຮອບ PCR ຫຼາຍເກີນໄປ - ຫຼຸດຈໍານວນຂອງຮອບ PCR ລົງ.
A-1 Primer—— ຄວາມສະເພາະທີ່ບໍ່ດີ —— ອອກແບບ primer ໃ,່, ປ່ຽນຕໍາ ແໜ່ງ ແລະຄວາມຍາວຂອງ primer ເພື່ອເພີ່ມຄວາມສະເພາະຂອງມັນ; ຫຼືປະຕິບັດ PCR ທີ່ຕິດຢູ່.
ແມ່ແບບ A-2 DNA
—— ແມ່ແບບບໍ່ບໍລິສຸດ —— ເຮັດຄວາມສະອາດແມ່ແບບຫຼືສະກັດ DNA ດ້ວຍຊຸດເຄື່ອງເຮັດຄວາມສະອາດ.
A-3 ມກ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ
—— mg2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງເກີນໄປ - ຫຼຸດຜ່ອນ Mg ຢ່າງຖືກຕ້ອງ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ: ເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງ Mg2+ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນໂດຍຊຸດປະຕິກິລິຍາຈາກ 1 mM ຫາ 3 mM ໂດຍມີໄລຍະຫ່າງ 0.5 mM ເພື່ອກໍານົດ Mg ທີ່ດີທີ່ສຸດ2+ ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງແຕ່ລະແມ່ແບບແລະ primer.
A-4 dNTP
—— ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ dNTPs ສູງເກີນໄປ —— ຫຼຸດຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ dNTP ຢ່າງເາະສົມ
A-5 ອຸນຫະພູມອ່ອນເພຍ
—— ອຸນຫະພູມໃນການຫຼໍ່ຫຼອມຕໍ່າເກີນໄປ —— ເພີ່ມອຸນຫະພູມໃນການຫຼໍ່ທີ່ເroາະສົມ
A-6 ຮອບວຽນ
—— ຫຼາຍຮອບເກີນໄປ —— ເພີ່ມປະສິດທິພາບ ຈຳ ນວນຮອບວຽນ
ຂັ້ນຕອນທໍາອິດແມ່ນເລືອກ polymerase ທີ່ເາະສົມ. ປົກກະຕິ Taq polymerase ບໍ່ສາມາດກວດຄືນໄດ້ເນື່ອງຈາກຂາດກິດຈະກໍາ exonuclease 3'-5 ', ແລະຄວາມບໍ່ເຂົ້າກັນຈະຊ່ວຍຫຼຸດປະສິດທິພາບການຂະຫຍາຍຂອງຊິ້ນສ່ວນໄດ້ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ. ເພາະສະນັ້ນ, Taq polymerase ປົກກະຕິບໍ່ສາມາດຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນເປົ້າlargerາຍໃຫຍ່ກວ່າ 5 kb ໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບ. Taq polymerase ທີ່ມີການດັດແປງພິເສດຫຼື polymerase ຄວາມຊື່ສັດສູງອື່ນ other ຄວນຖືກເລືອກເພື່ອປັບປຸງປະສິດທິພາບການຂະຫຍາຍແລະຕອບສະ ໜອງ ກັບຄວາມຕ້ອງການຂອງການຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນທີ່ຍາວນານ. ນອກຈາກນັ້ນ, ການຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນທີ່ຍາວອອກຍັງຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການປັບປ່ຽນການອອກແບບເບື້ອງຕົ້ນທີ່ເ,າະສົມ, ເວລາທີ່ບໍ່ມີຕົວຕົນ, ເວລາຂະຫຍາຍ, pH ຂອງກັນຊົນ, ແລະອື່ນ Usually. ເພື່ອປ້ອງກັນຄວາມເສຍຫາຍຂອງແມ່ແບບ, ເວລາ denaturation ຢູ່ທີ່ 94 ° C ຄວນຈະຫຼຸດລົງເປັນ 30 ວິນາທີຫຼື ໜ້ອຍ ກ່ວາຕໍ່ຮອບ, ແລະເວລາທີ່ຈະເພີ່ມອຸນຫະພູມເປັນ 94 ° C ກ່ອນການຂະຫຍາຍຄວນ ໜ້ອຍ ກວ່າ 1 ນາທີ. ຍິ່ງໄປກວ່ານັ້ນ, ການຕັ້ງອຸນຫະພູມຂະຫຍາຍຢູ່ທີ່ປະມານ 68 ° C ແລະການອອກແບບເວລາຂະຫຍາຍຕາມອັດຕາ 1 kb/min ສາມາດຮັບປະກັນການຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນທີ່ຍາວອອກໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບ.
ອັດຕາຄວາມຜິດພາດຂອງການຂະຫຍາຍ PCR ສາມາດຫຼຸດລົງໄດ້ໂດຍການໃຊ້ DNA polymerases ຕ່າງ with ດ້ວຍຄວາມຊື່ສັດສູງ. ໃນບັນດາໂປຼຕີນທັງTaົດຂອງ Taq DNA ທີ່ພົບມາຮອດປະຈຸບັນ, ເອນໄຊ Pfu ມີອັດຕາຄວາມຜິດພາດຕໍ່າສຸດແລະຄວາມຊື່ສັດສູງສຸດ (ເບິ່ງຕາຕະລາງຄັດຕິດ). ນອກ ເໜືອ ໄປຈາກການຄັດເລືອກເອນໄຊ, ນັກຄົ້ນຄວ້າຍັງສາມາດຫຼຸດອັດຕາການກາຍພັນຂອງ PCR ຕື່ມອີກໂດຍການປັບປຸງເງື່ອນໄຂປະຕິກິລິຍາໃຫ້ດີທີ່ສຸດ, ລວມທັງການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງສ່ວນປະກອບຂອງສານກັນບູດ, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ polymerase ທີ່ມີຄວາມຮ້ອນທີ່ສຸດແລະການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງcycleາຍເລກຮອບວຽນ PCR.
ປະເພດຜະລິດຕະພັນ
ເປັນຫຍັງເລືອກພວກເຮົາ
ນັບຕັ້ງແຕ່ການສ້າງຕັ້ງ, ໂຮງງານຂອງພວກເຮົາໄດ້ພັດທະນາຜະລິດຕະພັນລະດັບໂລກອັນທໍາອິດໂດຍຍຶດັ້ນຫຼັກການ
ຂອງຄຸນນະພາບຄັ້ງທໍາອິດ. ຜະລິດຕະພັນຂອງພວກເຮົາໄດ້ຮັບຊື່ສຽງໂດ່ງດັງໃນອຸດສາຫະກໍາແລະເປັນທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ໃນບັນດາລູກຄ້າໃand່ແລະເກົ່າ.
- ໂທ: +86 010-59822688
- ຕຶກ 5, ເລກທີ 86, ຖະ ໜົນ Shuangying ຕາເວັນຕົກ, ເມືອງ Changping, ປັກກິ່ງ.
- people@tiangen.com
