2 × Taq Platinum PCR ປະສົມ

ໂປຣຕີນ DNA polymerase thermostable ທີ່ມີຄວາມຊື່ສັດສູງສຸດຂອງ HotStart ທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດສູງສຸດ.

Taq Platinum DNA Polymerase ເປັນສານເຄມີດັດແກ້ HotStart Taq polymerase ທີ່ມີກິດຈະກໍາ exonuclease 3′-5 and ແລະກິດຈະກໍາ exonuclease 5′-3. ກິດຈະກໍາຂອງເອນໄຊຂອງ Taq Platinum DNA Polymerase ຖືກສະກັດຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ. ກິດຈະກໍາຂອງມັນສາມາດຖືກເປີດໃຊ້ງານໄດ້ພຽງແຕ່ຫຼັງຈາກການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນຢູ່ທີ່ 94 ° C ເປັນເວລາ 5-10 ນາທີ, ສະນັ້ນການຫຼີກເວັ້ນການຂະຫຍາຍທີ່ບໍ່ສະເພາະເຈາະຈົງທີ່ເກີດຈາກການລອກແບບ primer ທີ່ບໍ່ໄດ້ເຈາະຈົງຫຼື primer dimer ຢູ່ທີ່ອຸນຫະພູມຕໍ່າກ່ອນຮອບວຽນທໍາອິດຂອງປະຕິກິລິຍາ PCR, ແລະປັບປຸງຄວາມອ່ອນໄຫວຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ. ແລະຄວາມສະເພາະຂອງປະຕິກິລິຍາ PCR. ນອກຈາກນັ້ນ, Taq Platinum DNA Polymerase ມີຄວາມຊື່ສັດສູງຫຼາຍ, ເຊິ່ງເປັນອັນດັບສອງດີທີ່ສຸດຕໍ່ Pfu polymerase. ຄວາມໄວຂະຫຍາຍຂອງ DNA polymerization ແມ່ນໄວກ່ວາ Pfu polymerase ແລະປະສິດທິພາບການຂະຫຍາຍແມ່ນສູງກວ່າ.

ແມວ. ບໍ່	ຂະ ໜາດ ບັນຈຸ
4992789	5x1ml
4992790	5 × 1 ມລ

ສົ່ງອີເມວຫາພວກເຮົາ

ລາຍລະອຽດຜະລິດຕະພັນ

ຕົວຢ່າງການທົດລອງ

ຄຳ ຖາມທີ່ຖືກຖາມເລື້ອຍ

ປ້າຍຜະລິດຕະພັນ

ຄໍານິຍາມກິດຈະກໍາ

1 ໜ່ວຍ (U) Taq Platinum DNA Polymerase activity ຖືກ ກຳ ນົດເປັນປະລິມານຂອງ enzyme ທີ່ຕ້ອງການເພື່ອລວມເອົາ 10 nmol deoxynucleotides ເຂົ້າໄປໃນສານທີ່ບໍ່ສາມາດລະລາຍໃນກົດໄດ້ທີ່ 74 ° C ພາຍໃນ 30 ນາທີໂດຍ ນຳ ໃຊ້ DNA ເຊື້ອອະສຸຈິ salmon ທີ່ເປີດໃຊ້ເປັນແມ່ແບບ/primer.

ການຄວບຄຸມຄຸນະພາບ

ຄວາມບໍລິສຸດໂດຍການກວດຫາ SDS-PAGE ແມ່ນຫຼາຍກວ່າ 99%; ບໍ່ພົບກິດຈະກໍາຂອງ nuclease exogenous; ພັນທຸກໍາສໍາເນົາອັນດຽວຢູ່ໃນກໍາມະພັນຂອງມະນຸດສາມາດຂະຫຍາຍໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບ; ບໍ່ມີການປ່ຽນແປງກິດຈະກໍາທີ່ສໍາຄັນເມື່ອເກັບຮັກສາໄວ້ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງເປັນເວລານຶ່ງອາທິດ.

ພາລາມິເຕີເຕັກນິກຫຼັກ

ມັນມີກິດຈະກໍາ exonuclease 5′-3 and ແລະກິດຈະກໍາ exonuclease 3′-5,, ແລະຄວາມຊື່ສັດຂອງມັນແມ່ນຢູ່ໃກ້ກັບ Pfu polymerase. ຄວາມໄວການຂະຫຍາຍຂອງ Taq Platinum Polymerase ແມ່ນໄວກ່ວາ Pfu polymerase ແລະປະສິດທິພາບການຂະຫຍາຍແມ່ນສູງກວ່າ. ຜະລິດຕະພັນ PCR ສາມາດໄດ້ຮັບການຜູກມັດໂດຍກົງໃສ່ປາຍສຸດທີ່ບໍ່ສະຫຼາດຫຼືໂຄນດ້ວຍ vector TA. ຖ້າຕ້ອງການປັບປຸງປະສິດທິພາບໃນການສ້າງໂຄນ, ແນະ ນຳ ໃຫ້ເຮັດການກັ່ນຕອງກ່ອນແລະເພີ່ມ 3'-dA overhangs ກ່ອນທີ່ຈະໂຄນເຂົ້າໄປໃນ vector TA.

ໜຶ່ງ ທໍ່ Taq Platinum MasterMix (ການຢັ້ງຢືນຜະລິດຕະພັນເຕັກໂນໂລຍີສູງລະດັບຊາດ)

Ta The Taq Platinum MasterMix ໄດ້ປັບປຸງຄວາມສະເພາະເຈາະຈົງແລະຄວາມອ່ອນໄຫວຂອງປະຕິກິລິຍາ PCR ແລະສາມາດຂະຫຍາຍແມ່ແບບທີ່ຊັບຊ້ອນດ້ວຍເນື້ອຫາ GC ສູງ, ໂຄງສ້າງຂັ້ນສອງແລະຄ້າຍຄືກັນ. ຕ່ ຳ ສຸດ 2 ສະບັບຂອງແມ່ແບບເປົ້າcanາຍສາມາດຂະຫຍາຍອອກໄດ້, ຮັບປະກັນຜົນການທົດລອງທີ່ຖືກຕ້ອງຫຼາຍຂຶ້ນ.

formula ສູດ Taq Platinum MasterMix ທີ່ເປັນເອກະລັກສະເພາະເຮັດໃຫ້ລະບົບປະຕິກິລິຍາທັງstableົດມີຄວາມstableັ້ນຄົງຫຼາຍ, ແລະກິດຈະ ກຳ ຈະບໍ່ໄດ້ຮັບຜົນກະທົບຈາກການແຊ່ແຂງລະລາຍຫຼືການເກັບຮັກສາໄວ້ດົນນານຢູ່ທີ່ 4 ° C.

solution ວິທີແກ້ໄຂປະສົມ PCR ທີ່ກຽມໄວ້ລ່ວງ ໜ້າ ທີ່ມີປະສິດທິພາບແລະມີປະສິດທິພາບສາມາດເຮັດໃຫ້ການດໍາເນີນງານໄວແລະລຽບງ່າຍ, ຫຼຸດຜ່ອນຄວາມແຮງຂອງແຮງງານແລະຄວາມຜິດພາດໃນການເກັບຕົວຢ່າງ. ເຄື່ອງເພີ່ມປະສິດທິພາບແລະປະສິດທິພາບ PCR ທີ່ມີປະສິດທິພາບສູງແມ່ນລວມຢູ່ໃນເຄື່ອງປະສົມເຊັ່ນກັນ, ເຊິ່ງຫຼຸດຜ່ອນຄວາມຕ້ອງການໃນເງື່ອນໄຂ PCR.

product ຜະລິດຕະພັນນີ້ມີທັງລະບົບປະກອບດ້ວຍສານສີແລະບໍ່ມີສີຍ້ອມ. ຜະລິດຕະພັນ MasterMix ທີ່ມີສີຍ້ອມຜ້າສາມາດຖືກໄຟຟ້າໂດຍກົງຫຼັງຈາກ PCR, ໂດຍບໍ່ມີການເພີ່ມການໂຫຼດໂຫຼດ.

ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ

ມັນສາມາດທົດແທນ Pfu polymerase ເພື່ອຂະຫຍາຍຜະລິດຕະພັນທີ່ມີຄວາມຊື່ສັດສູງຈາກແມ່ແບບທີ່ຊັບຊ້ອນເຊັ່ນ: genomes, ແລະມັນເsuitableາະສົມສໍາລັບການນໍາໃຊ້ເຊັ່ນ: ການຄັດລອກພັນທຸກໍາການສະແດງອອກ, ການກາຍພັນສະເພາະຂອງສະຖານທີ່ແລະການວິເຄາະຂອງ polymorphism nucleotide ດຽວ (SNP), ແລະອື່ນ.

ຂໍ້ຄວນລະວັງໃນການອອກແບບ PCR Primers:

ຄວາມຍາວຂອງ primer ປົກກະຕິແລ້ວແມ່ນ 20-25 mer. ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ເມື່ອປະຕິບັດ PCR ທີ່ມີຊິ້ນຍາວ, ຄວາມຍາວຂອງ primer ຄວນຈະເພີ່ມຂຶ້ນເປັນ 30-35 mer.

■ບໍ່ມີການຈັບຄູ່ກັນລະຫວ່າງສອງຊັ້ນຮອງພື້ນ, ໂດຍສະເພາະສໍາລັບ 3 ຖານສຸດທ້າຍຢູ່ທີ່ 3 ′.

content ເນື້ອໃນ GC ຄວນຈະເປັນ 50-60%, ແລະຫຼີກເວັ້ນ GC ຫຼື AT ທີ່ອຸດົມສົມບູນໃນທ້ອງຖິ່ນ. ເພື່ອເຮັດໃຫ້ primer ແລະແມ່ແບບຜູກມັດໄດ້ຢ່າງັ້ນຄົງ, ຫຼີກເວັ້ນໂຄງສ້າງທີ່ມີຄວາມອຸດົມສົມບູນຢູ່ປາຍ 3.

■ຫຼີກລ້ຽງການໃຊ້ primer ເພື່ອປະກອບເປັນໂຄງສ້າງຂັ້ນສອງ.

■ເລືອກ primers ສອງອັນທີ່ມີອຸນຫະພູມ Tm ຢູ່ໃກ້ກັນ.

ການຄິດໄລ່ມູນຄ່າ Tm ຂອງ Primers ສໍາລັບ PCR:

■ເມື່ອ primer ໜ້ອຍ ກວ່າ 20 mer: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C).

■ເມື່ອ primer ຫຼາຍກ່ວາ 20 mer: Tm = 81.5+0.41 × (GC%)-600/L, ບ່ອນທີ່ L ແມ່ນຄວາມຍາວຂອງ primer.

■ຕັ້ງອຸນຫະພູມໃນການຫຼໍ່ຫຼອມຢູ່ທີ່ (Tm-5) ° C.

ການປ້ອນເຂົ້າຂອງ PCR Primer

ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນສຸດທ້າຍທີ່ເappropriateາະສົມຂອງ primers ສາມາດເລືອກໄດ້ລະຫວ່າງ 0.1 μMແລະ 1.0 μM. ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ primer ຕໍ່າເກີນໄປນໍາໄປສູ່ຜົນຜະລິດຕໍ່າຂອງຜະລິດຕະພັນການຂະຫຍາຍ, ໃນຂະນະທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂອງ primer ສູງເກີນໄປແມ່ນມີຄວາມສ່ຽງຕໍ່ການຂະຫຍາຍທີ່ບໍ່ແມ່ນສະເພາະ. ໂດຍປົກກະຕິແລ້ວ, ເມື່ອປະລິມານຂອງແມ່ແບບ DNA ແມ່ນໃຫຍ່ຫຼືສັບຊ້ອນ DNA ແມ່ແບບ (ເຊັ່ນ: DNA ພັນທຸກໍາຂອງມະນຸດ) ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນແມ່ແບບ, ຄວາມເຂັ້ມຂອງ primer ຄວນຕໍ່າກວ່າ. ເມື່ອປະລິມານຂອງແມ່ແບບ DNA ແມ່ນນ້ອຍຫຼືແບບແມ່ແບບ DNA (ຕົວຢ່າງ, plasmid DNA, ແລະອື່ນ)) ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນແມ່ແບບ, ຄວາມເຂັ້ມຂອງ primer ຄວນສູງກວ່າ.

ຜະລິດຕະພັນທັງຫມົດສາມາດໄດ້ຮັບການປັບແຕ່ງສໍາລັບ ODM/OEM. ສໍາລັບລາຍລະອຽດ,ກະລຸນາຄລິກບໍລິການລູກຄ້າ (ODM/OEM)

ທີ່ຜ່ານມາ: 2 × HotStart Taq PCR Mix

ຕໍ່ໄປ: 2 × Taq Plus PCR ປະສົມ

ໃຊ້ DNA ພັນທຸ ກຳ ເປັນແມ່ແບບເພື່ອຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນ 1 kb. ຫຼັງຈາກປະຕິກິລິຍາ PCR, ໃຊ້ 5 μlເພື່ອກວດຫາ electrophoresis.

ຖາມ: ບໍ່ມີແຖບຂະຫຍາຍສຽງ

ແມ່ແບບ A-1

template ແມ່ແບບປະກອບດ້ວຍສິ່ງປົນເປື້ອນທາດໂປຼຕີນຫຼືຕົວຍັບຍັ້ງ Taq, ແລະອື່ນ — —— ເຮັດຄວາມສະອາດແມ່ແບບ DNA, ກຳ ຈັດສິ່ງເປິເປື້ອນຂອງໂປຣຕີນຫຼືສະກັດເອົາແມ່ແບບ DNA ອອກພ້ອມກັບຊຸດເຄື່ອງກັ່ນຕອງ.

■ການປະຕິເສດແມ່ແບບບໍ່ສົມບູນແບບ - ເພີ່ມອຸນຫະພູມທີ່ມີຄວາມບໍ່ສົມດຸນຢ່າງເiatelyາະສົມແລະຍືດເວລາຂອງການເຮັດໃຫ້ມີການຄໍ້າປະກັນໄດ້ຢ່າງເາະສົມ.

rad ການເສື່ອມສະພາບຂອງແມ່ແບບ —— ກະກຽມແມ່ແບບຄືນໃ່.

A-2 Primer

quality ຄຸນນະພາບທີ່ບໍ່ດີຂອງ primers —— ສັງເຄາະສີ primer ຄືນໃ່.

rad ການເສື່ອມປະສິດທິພາບຂອງ primer —— ລວບລວມເອົາ primers ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມສູງໃສ່ໃນປະລິມານ ໜ້ອຍ ເພື່ອຮັກສາ. ຫຼີກເວັ້ນການແຊ່ແຂງຫຼາຍ tha ແລະການລະລາຍຫຼືການເກັບຮັກສາໄວ້ໃນໄລຍະຍາວ 4 ° C.

design ການອອກແບບ primers ບໍ່ເperາະສົມ (ຕົວຢ່າງຄວາມຍາວຂອງ primer ບໍ່ພຽງພໍ, dimer ສ້າງຂຶ້ນລະຫວ່າງ primers, ແລະອື່ນ)) -ການອອກແບບ primers ຄືນໃavoid່ (ຫຼີກເວັ້ນການສ້າງ primer dimer ແລະໂຄງສ້າງຂັ້ນສອງ).

A-3 ມກ²⁺ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ

g ມກ²⁺ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຕໍ່າເກີນໄປ - ເພີ່ມປະລິມານ mg ຢ່າງເາະສົມ²⁺ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ: ເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງ Mg²⁺ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນໂດຍຊຸດປະຕິກິລິຍາຈາກ 1 mM ຫາ 3 mM ໂດຍມີໄລຍະຫ່າງ 0.5 mM ເພື່ອກໍານົດ Mg ທີ່ດີທີ່ສຸດ²⁺ ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງແຕ່ລະແມ່ແບບແລະ primer.

A-4 ອຸນຫະພູມອ່ອນເພຍ

temperature ອຸນຫະພູມໃນການຫລອມສູງສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ການຜູກມັດຮອງພື້ນແລະແມ່ແບບ. —— ຫຼຸດອຸນຫະພູມໃນການຫຼອມແລະປັບສະພາບໃຫ້ດີທີ່ສຸດດ້ວຍການໄລ່ສີ 2 ອົງສາ.

A-5 ເວລາຂະຫຍາຍ

time ເວລາຂະຫຍາຍສັ້ນ - ເພີ່ມເວລາການຂະຫຍາຍ.

ຖາມ: ໃນທາງບວກທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ

ປະກົດການ: ຕົວຢ່າງເຊີງລົບຍັງສະແດງໃຫ້ເຫັນແຖບ ລຳ ດັບເປົ້າາຍ.

A-1 ການປົນເປື້ອນຂອງ PCR

■ຂ້າມການປົນເປື້ອນຂອງລໍາດັບເປົ້າorາຍຫຼືຜະລິດຕະພັນການຂະຫຍາຍ - ລະມັດລະວັງບໍ່ໃຫ້ທໍ່ສົ່ງນໍ້າທີ່ມີລໍາດັບເປົ້າinາຍຢູ່ໃນຕົວຢ່າງທາງລົບຫຼືເຮັດໃຫ້ມັນໄຫຼອອກຈາກທໍ່ centrifuge. ນ້ ຳ ຢາຫຼືອຸປະກອນຄວນໄດ້ຮັບການອັດຕະໂນມັດເພື່ອ ກຳ ຈັດກົດນິວເຄຼຍທີ່ມີຢູ່, ແລະການມີການປົນເປື້ອນຄວນຖືກ ກຳ ນົດຜ່ານການທົດລອງຄວບຄຸມທາງລົບ.

ination ການປົນເປື້ອນສານ Reagent —— ວາງນໍ້າຢາແລະເກັບຮັກສາໄວ້ໃນອຸນຫະພູມຕໍ່າ.

A-2 Primer

g ມກ²⁺ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຕໍ່າເກີນໄປ - ເພີ່ມປະລິມານ mg ຢ່າງເາະສົມ²⁺ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ: ເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງ Mg²⁺ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນໂດຍຊຸດປະຕິກິລິຍາຈາກ 1 mM ຫາ 3 mM ໂດຍມີໄລຍະຫ່າງ 0.5 mM ເພື່ອກໍານົດ Mg ທີ່ດີທີ່ສຸດ²⁺ ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງແຕ່ລະແມ່ແບບແລະ primer.

design ການອອກແບບ primer ທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ, ແລະລໍາດັບເປົ້າhasາຍມີຄວາມຄ້າຍຄືກັນກັບລໍາດັບທີ່ບໍ່ແມ່ນເປົ້າາຍ. --- ການອອກແບບຄືນໃ່.

ຖາມ: ການຂະຫຍາຍທີ່ບໍ່ແມ່ນສະເພາະ

ປະກົດການ: ວົງຂະຫຍາຍສຽງ PCR ແມ່ນບໍ່ສອດຄ່ອງກັບຂະ ໜາດ ທີ່ຄາດໄວ້, ທັງໃຫຍ່ຫຼືນ້ອຍ, ຫຼືບາງຄັ້ງທັງສອງແຖບຂະຫຍາຍສຽງສະເພາະແລະວົງດົນຕີການຂະຫຍາຍທີ່ບໍ່ສະເພາະເກີດຂຶ້ນ.

A-1 Primer

■ຄວາມສະເພາະຂອງ primer ບໍ່ດີ

—— primer ອອກແບບໃ່.

concentration ຄວາມເຂັ້ມຂອງ primer ສູງເກີນໄປ —— ເພີ່ມອຸນຫະພູມ denaturation ຢ່າງຖືກຕ້ອງແລະຍືດເວລາການເຮັດໃຫ້ເປັນ denaturation ໄດ້ດົນ.

A-2 Mg²⁺ ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ

■ The Mg²⁺ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງເກີນໄປ —— ຫຼຸດຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ Mg2+ ຢ່າງເາະສົມ: ເພີ່ມປະລິມານ Mg ໃຫ້ເາະສົມ²⁺ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນໂດຍຊຸດປະຕິກິລິຍາຈາກ 1 mM ຫາ 3 mM ໂດຍມີໄລຍະຫ່າງ 0.5 mM ເພື່ອກໍານົດ Mg ທີ່ດີທີ່ສຸດ²⁺ ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງແຕ່ລະແມ່ແບບແລະ primer.

A-3 Polymerase ຄວາມຮ້ອນທີ່ສຸດ

amount ປະລິມານເອນໄຊຫຼາຍເກີນໄປ - ຫຼຸດປະລິມານເອນໄຊລົງໄດ້ຢ່າງເatາະສົມໃນລະຫວ່າງ 0.5 U.

A-4 ອຸນຫະພູມອ່ອນເພຍ

temperature ອຸນຫະພູມໃນການຫຼໍ່ຫຼອມຕ່ ຳ ເກີນໄປ-ເພີ່ມອຸນຫະພູມໃນການຫຼໍ່ທີ່ເorາະສົມຫຼື ນຳ ໃຊ້ວິທີການຫຼອມທັງສອງຂັ້ນຕອນ.

ຮອບວຽນ A-5 PCR

cles ຮອບ PCR ຫຼາຍເກີນໄປ - ຫຼຸດຈໍານວນຂອງຮອບ PCR ລົງ.

ຖາມ: ແຜ່ນທີ່ມີຮອຍແຕກຫຼືເປື່ອຍ

A-1 Primer—— ຄວາມສະເພາະທີ່ບໍ່ດີ —— ອອກແບບ primer ໃ,່, ປ່ຽນຕໍາ ແໜ່ງ ແລະຄວາມຍາວຂອງ primer ເພື່ອເພີ່ມຄວາມສະເພາະຂອງມັນ; ຫຼືປະຕິບັດ PCR ທີ່ຕິດຢູ່.

ແມ່ແບບ A-2 DNA

—— ແມ່ແບບບໍ່ບໍລິສຸດ —— ເຮັດຄວາມສະອາດແມ່ແບບຫຼືສະກັດ DNA ດ້ວຍຊຸດເຄື່ອງເຮັດຄວາມສະອາດ.

A-3 ມກ²⁺ ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ

—— mg²⁺ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງເກີນໄປ - ຫຼຸດຜ່ອນ Mg ຢ່າງຖືກຕ້ອງ²⁺ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ: ເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງ Mg²⁺ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນໂດຍຊຸດປະຕິກິລິຍາຈາກ 1 mM ຫາ 3 mM ໂດຍມີໄລຍະຫ່າງ 0.5 mM ເພື່ອກໍານົດ Mg ທີ່ດີທີ່ສຸດ²⁺ ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງແຕ່ລະແມ່ແບບແລະ primer.

A-4 dNTP

—— ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ dNTPs ສູງເກີນໄປ —— ຫຼຸດຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ dNTP ຢ່າງເາະສົມ

A-5 ອຸນຫະພູມອ່ອນເພຍ

—— ອຸນຫະພູມໃນການຫຼໍ່ຫຼອມຕໍ່າເກີນໄປ —— ເພີ່ມອຸນຫະພູມໃນການຫຼໍ່ທີ່ເroາະສົມ

A-6 ຮອບວຽນ

—— ຫຼາຍຮອບເກີນໄປ —— ເພີ່ມປະສິດທິພາບ ຈຳ ນວນຮອບວຽນ

ຖາມ: ຄວນເພີ່ມ DNA ແມ່ແບບຫຼາຍປານໃດໃນລະບົບປະຕິກິລິຍາ PCR 50 μl?

ຖາມ: ເຮັດແນວໃດເພື່ອຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນຍາວ?

ຂັ້ນຕອນທໍາອິດແມ່ນເລືອກ polymerase ທີ່ເາະສົມ. ປົກກະຕິ Taq polymerase ບໍ່ສາມາດກວດຄືນໄດ້ເນື່ອງຈາກຂາດກິດຈະກໍາ exonuclease 3'-5 ', ແລະຄວາມບໍ່ເຂົ້າກັນຈະຊ່ວຍຫຼຸດປະສິດທິພາບການຂະຫຍາຍຂອງຊິ້ນສ່ວນໄດ້ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ. ເພາະສະນັ້ນ, Taq polymerase ປົກກະຕິບໍ່ສາມາດຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນເປົ້າlargerາຍໃຫຍ່ກວ່າ 5 kb ໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບ. Taq polymerase ທີ່ມີການດັດແປງພິເສດຫຼື polymerase ຄວາມຊື່ສັດສູງອື່ນ other ຄວນຖືກເລືອກເພື່ອປັບປຸງປະສິດທິພາບການຂະຫຍາຍແລະຕອບສະ ໜອງ ກັບຄວາມຕ້ອງການຂອງການຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນທີ່ຍາວນານ. ນອກຈາກນັ້ນ, ການຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນທີ່ຍາວອອກຍັງຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການປັບປ່ຽນການອອກແບບເບື້ອງຕົ້ນທີ່ເ,າະສົມ, ເວລາທີ່ບໍ່ມີຕົວຕົນ, ເວລາຂະຫຍາຍ, pH ຂອງກັນຊົນ, ແລະອື່ນ Usually. ເພື່ອປ້ອງກັນຄວາມເສຍຫາຍຂອງແມ່ແບບ, ເວລາ denaturation ຢູ່ທີ່ 94 ° C ຄວນຈະຫຼຸດລົງເປັນ 30 ວິນາທີຫຼື ໜ້ອຍ ກ່ວາຕໍ່ຮອບ, ແລະເວລາທີ່ຈະເພີ່ມອຸນຫະພູມເປັນ 94 ° C ກ່ອນການຂະຫຍາຍຄວນ ໜ້ອຍ ກວ່າ 1 ນາທີ. ຍິ່ງໄປກວ່ານັ້ນ, ການຕັ້ງອຸນຫະພູມຂະຫຍາຍຢູ່ທີ່ປະມານ 68 ° C ແລະການອອກແບບເວລາຂະຫຍາຍຕາມອັດຕາ 1 kb/min ສາມາດຮັບປະກັນການຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນທີ່ຍາວອອກໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບ.

ຖາມ: ເຮັດແນວໃດເພື່ອປັບປຸງຄວາມສັດຊື່ຕໍ່ການຂະຫຍາຍຂອງ PCR?

ອັດຕາຄວາມຜິດພາດຂອງການຂະຫຍາຍ PCR ສາມາດຫຼຸດລົງໄດ້ໂດຍການໃຊ້ DNA polymerases ຕ່າງ with ດ້ວຍຄວາມຊື່ສັດສູງ. ໃນບັນດາໂປຼຕີນທັງTaົດຂອງ Taq DNA ທີ່ພົບມາຮອດປະຈຸບັນ, ເອນໄຊ Pfu ມີອັດຕາຄວາມຜິດພາດຕໍ່າສຸດແລະຄວາມຊື່ສັດສູງສຸດ (ເບິ່ງຕາຕະລາງຄັດຕິດ). ນອກ ເໜືອ ໄປຈາກການຄັດເລືອກເອນໄຊ, ນັກຄົ້ນຄວ້າຍັງສາມາດຫຼຸດອັດຕາການກາຍພັນຂອງ PCR ຕື່ມອີກໂດຍການປັບປຸງເງື່ອນໄຂປະຕິກິລິຍາໃຫ້ດີທີ່ສຸດ, ລວມທັງການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງສ່ວນປະກອບຂອງສານກັນບູດ, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ polymerase ທີ່ມີຄວາມຮ້ອນທີ່ສຸດແລະການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງcycleາຍເລກຮອບວຽນ PCR.

ຂຽນຂໍ້ຄວາມຂອງເຈົ້າຢູ່ທີ່ນີ້ແລະສົ່ງໃຫ້ພວກເຮົາ

ປະເພດຜະລິດຕະພັນ

ເປັນຫຍັງເລືອກພວກເຮົາ

ນັບຕັ້ງແຕ່ການສ້າງຕັ້ງ, ໂຮງງານຂອງພວກເຮົາໄດ້ພັດທະນາຜະລິດຕະພັນລະດັບໂລກອັນທໍາອິດໂດຍຍຶດັ້ນຫຼັກການ
ຂອງຄຸນນະພາບຄັ້ງທໍາອິດ. ຜະລິດຕະພັນຂອງພວກເຮົາໄດ້ຮັບຊື່ສຽງໂດ່ງດັງໃນອຸດສາຫະກໍາແລະເປັນທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ໃນບັນດາລູກຄ້າໃand່ແລະເກົ່າ.

ສອບຖາມ