English

ການປະສົມການຂະຫຍາຍສຽງ TIANSeq HiFi

ການຂະຫຍາຍຫ້ອງສະPCຸດ PCR premix ດ້ວຍຜົນຜະລິດຫ້ອງສະhighຸດສູງ, ຄວາມຊື່ສັດສູງແລະຄວາມ ລຳ ອຽງພື້ນຖານຕໍ່າ.

TIANSeq HiFi Ampli fi cation Mix ເປັນເຄື່ອງບູລິມະສິດການຂະຫຍາຍຕົວ PCR ທີ່ມີຄວາມຊື່ສັດສູງໃnew່, ເຊິ່ງເsuitableາະສົມກັບການຂະຫຍາຍ PCR ຂອງຫ້ອງສະsequຸດ ລຳ ດັບການສົ່ງຜົນສູງແລະການກວດຫາແລະການກວດຫາທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ PCR ອື່ນ other. Ultra HiFi DNA Polymerase ໃນການແກ້ໄຂກ່ອນການປະສົມແມ່ນປະເພດໃof່ຂອງ DNA polymerase DNA ທີ່ມີຄວາມຊື່ສັດໄວແລະສູງທີ່ພັດທະນາໂດຍເຕັກໂນໂລຍີວິວັດທະນາການໂມເລກຸນໂດຍກົງ, ເຊິ່ງເພີ່ມຄວາມສໍາພັນຂອງ DNA polymerase ກັບແມ່ແບບ. ເອນໄຊນີ້ໄດ້ປັບປຸງຄວາມໄວການຂະຫຍາຍແລະຄວາມສາມາດຂະຫຍາຍ, ແລະອັດຕາຄວາມສໍາເລັດຂອງ PCR ແລະຜົນຜະລິດຂອງຜະລິດຕະພັນແມ່ນເພີ່ມຂຶ້ນ. ເອນໄຊຍັງມີກິດຈະກໍາ exonuclease 3′- 5 excellent ທີ່ດີເລີດ (ກິດຈະກໍາການກວດແກ້ຄືນໃ່), ແລະຄວາມຊື່ສັດຂອງມັນສາມາດບັນລຸເຖິງລະດັບຂອງຜະລິດຕະພັນຫຼັກໃນຕະຫຼາດ, ດ້ວຍຄວາມຖືກຕ້ອງໃນຂະບວນການຂະຫຍາຍພັນທຸກໍາແລະຫ້ອງສະensຸດໄດ້ຮັບປະກັນ. ນອກຈາກນັ້ນ, DNA polymerase ໃນຜະລິດຕະພັນມີຟັງຊັນ HotStart, ເຊິ່ງສາມາດຄວບຄຸມການຂະຫຍາຍກິດຈະກໍາທີ່ບໍ່ແມ່ນສະເພາະແລະການສູນເສຍກິດຈະກໍາຂອງເອນໄຊໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບພາຍໃຕ້ອຸນຫະພູມຕໍ່າ, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງຮັບປະກັນຄວາມສະເພາະແລະຄວາມstabilityັ້ນຄົງຂອງການຂະຫຍາຍ PCR. ລະບົບການປັບປຸງປະຕິກິລິຍາ PCR ຍັງລວມຢູ່ໃນເຄື່ອງປະສົມ, ເຊິ່ງບໍ່ພຽງແຕ່ປັບປຸງຄວາມstabilityັ້ນຄົງຂອງເຄື່ອງປະສົມ, ເພີ່ມຄວາມທົນທານຂອງ polymerase ຕໍ່ກັບຕົວຍັບຍັ້ງປະຕິກິລິຍາ PCR, ແຕ່ຍັງຊ່ວຍປັບປຸງການປັບຕົວຂອງ Ultra HiFi DNA Polymerase ໃຫ້ເປັນແມ່ແບບທີ່ມີເນື້ອໃນ GC ແຕກຕ່າງກັນ, ສະນັ້ນ ວ່າຜະລິດຕະພັນມີຕົວຢ່າງທົ່ວໄປທົ່ວໄປແລະລະດັບການປ້ອນຕົວຢ່າງ, ແລະຫຼຸດຜ່ອນຄວາມມັກພື້ນຖານຂອງປະຕິກິລິຍາ PCR.

ແມວ. ບໍ່ ຂະ ໜາດ ບັນຈຸ
4992369 1 ມລ
4992370 5 × 1 ມລ
4992371 5*1 ມລ
4992372 5*1 ມລ

ລາຍລະອຽດຜະລິດຕະພັນ

ຕົວຢ່າງການທົດລອງ

ຄຳ ຖາມທີ່ຖືກຖາມເລື້ອຍ

ປ້າຍຜະລິດຕະພັນ

ທາງລຸ່ມ

ການຂະຫຍາຍ PCR ຂອງຫໍສະຸດ NGS, ການຂະຫຍາຍ PCR ຕາມ ລຳ ດັບຮຸ່ນທີ 1, ການສ້າງຄວາມຈົງຮັກພັກດີສູງ, ການກວດຫາ SNP, ການກາຍພັນສະເພາະຂອງສະຖານທີ່, ແລະອື່ນ etc. .

ຄຸນ​ລັກ​ສະ​ນະ

ampl ການຂະຫຍາຍສຽງທີ່ມີປະສິດທິພາບສູງ: ຮັບປະກັນອັດຕາການປ່ຽນແປງແລະຫຼຸດຮອບວຽນການຂະຫຍາຍ.
Pre ຄວາມມັກຕ່ ຳ: ປະສິດທິພາບການຂະຫຍາຍສຽງທີ່ສົມດຸນ ສຳ ລັບແມ່ແບບ DNA ທີ່ມີເນື້ອໃນ GC% ແຕກຕ່າງກັນ.
specific ສະເພາະເຈາະຈົງສູງ: ດ້ວຍຄຸນສົມບັດ HotStart ແລະສະເພາະເຈາະຈົງທີ່ເຂັ້ມແຂງ.
f ຄວາມຊື່ສັດສູງ: ຄວາມສັດຊື່ແມ່ນສູງກວ່າ Taq DNA polymerase 50 ເທົ່າ.
sens ຄວາມລະອຽດອ່ອນສູງ: ການປ້ອນແມ່ແບບເຂົ້າໄປສາມາດຕໍ່າໄດ້ທີ່ 1 pg.

ຜະລິດຕະພັນທັງຫມົດສາມາດໄດ້ຮັບການປັບແຕ່ງສໍາລັບ ODM/OEM. ສໍາລັບລາຍລະອຽດ,ກະລຸນາຄລິກບໍລິການລູກຄ້າ (ODM/OEM)

  • ທີ່ຜ່ານມາ:
  • ຕໍ່ໄປ:
    • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example ຮູບ 1. ການສ້າງຫ້ອງສະofຸດ DNA ຂອງພັນທຸ ກຳ ທີ່ມີອັດຕາສ່ວນ GC ແຕກຕ່າງກັນ (ການປ້ອນເຂົ້າພັນທຸ ກຳ 10 ng, ການຂະຫຍາຍ 8 ຮອບ) ໄດ້ ດຳ ເນີນໄປພ້ອມ simultaneously ກັນໂດຍການ ນຳ ໃຊ້ TIANSeq HiFi Amplification Mix ແລະ enzyme HiFi ຈາກຜູ້ສະ ໜອງ K ແລະ N, ແລະຜົນໄດ້ຮັບຂອງຫ້ອງສະwasຸດຖືກກວດພົບໂດຍ Agilent 2100. ຜົນໄດ້ຮັບສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ TIANSeq HiFi Amplification Mix ມີຜົນຜະລິດຫ້ອງສະhighຸດສູງ, ມີຄວາມເປັນເອກະພາບກັນທີ່ເຂັ້ມແຂງສໍາລັບເນື້ອໃນ GC ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ແລະປະສິດທິພາບການປັບປຸງຫ້ອງສະwasຸດແມ່ນດີກ່ວາຜູ້ສະ ໜອງ ອື່ນ other.
    Experimental Example ການຈັດ ລຳ ດັບຂໍ້ມູນໃຊ້ TIANSeq HiFi Amplification Mix ແລະ enzyme HiFi ນໍາໃຊ້ເປັນພິເສດສໍາລັບການຂະຫຍາຍຫ້ອງສະNGຸດ NGS ຈາກຜູ້ສະ ໜອງ K ແລະ N ສໍາລັບການຂະຫຍາຍຫ້ອງສະofຸດຂອງ DNA ພັນທຸກໍາອັນດຽວກັນ (ການປ້ອນຂໍ້ມູນຂອງ genome ແມ່ນ 10 ng). ຫຼັງຈາກການຈັດລໍາດັບ, ວິເຄາະການຄຸ້ມຄອງແລະອັດຕາການຊໍ້າຊ້ອນຂອງຫ້ອງສະຸດ.
    ການຕັ້ງຄ່າ GCExperimental Example ຮູບ 2. ຂະຫຍາຍຫ້ອງສະgenຸດ ​​genome ທີ່ມີເນື້ອໃນ CG ແຕກຕ່າງກັນໂດຍໃຊ້ TIANSeq HiFi Amplification Mix ແລະ HIFi ຈາກຜູ້ສະ ໜອງ K ແລະ N. ຂອງບໍລິສັດ K ແລະດີກ່ວາຜະລິດຕະພັນຂອງບໍລິສັດ N. ຜົນໄດ້ຮັບສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການຄຸ້ມຄອງຂອງຫໍສະificationຸດເຄື່ອງຂະຫຍາຍສຽງ TIANSeq HiFi Amplification Mix ແມ່ນສູງ, ອັດຕາການຊໍ້າຊ້ອນຕອບສະ ໜອງ ໄດ້ຄວາມຮຽກຮ້ອງຕ້ອງການ, ແລະການຂະຫຍາຍຫ້ອງສະisຸດທຽບເທົ່າກັບຄູ່ແຂ່ງ.
    ຖາມ: ການແຜ່ກະຈາຍທົ່ວໄປຂອງຂະ ໜາດ ຊິ້ນສ່ວນຢູ່ໃນຫ້ອງສະNGຸດ NGS ແມ່ນຫຍັງ?

    ປັດຈຸບັນ, ເຕັກໂນໂລຍີການຈັດລໍາດັບຄວາມໄວສູງສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນອີງໃສ່ເທັກໂນໂລຍີການຮຽງລໍາດັບລຸ້ນຕໍ່ໄປ. ເນື່ອງຈາກວ່າຄວາມຍາວການອ່ານຂອງເທັກໂນໂລຍີການຮຽງລໍາດັບລຸ້ນຕໍ່ໄປແມ່ນມີຈໍາກັດ, ພວກເຮົາຕ້ອງແຍກລໍາດັບຄວາມຍາວທັງintoົດອອກເປັນຫ້ອງສະfragຸດຊິ້ນສ່ວນນ້ອຍ to ເພື່ອລໍາດັບ. ອີງຕາມຄວາມຕ້ອງການຂອງການທົດລອງການຈັດລໍາດັບທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ໂດຍປົກກະຕິແລ້ວພວກເຮົາເລືອກການຈັດລໍາດັບຊັ້ນດຽວຫຼືສິ້ນສຸດສອງເທື່ອ. ປະຈຸບັນຊິ້ນສ່ວນ DNA ຂອງຫ້ອງສະsequຸດຈັດ ລຳ ດັບລຸ້ນຕໍ່ໄປໂດຍທົ່ວໄປແມ່ນແຈກຢາຍຢູ່ໃນລະດັບ 200-800 bp.

    excel
    ຖາມ: ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ DNA ຂອງຫ້ອງສະconstructedຸດທີ່ສ້າງຂຶ້ນແມ່ນຕໍ່າ.

    ກ) DNA ບໍ່ມີຄຸນນະພາບແລະມີສານຍັບຍັ້ງ. ໃຊ້ຕົວຢ່າງ DNA ທີ່ມີຄຸນນະພາບສູງເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການສະກັດກັ້ນການເຄື່ອນໄຫວຂອງເອນໄຊ.

    ຂ) ຈໍານວນຕົວຢ່າງ DNA ແມ່ນບໍ່ພຽງພໍເມື່ອນໍາໃຊ້ວິທີການທີ່ບໍ່ມີ PCR ເພື່ອສ້າງຫ້ອງສະDNAຸດ DNA. ເມື່ອການປ້ອນຂໍ້ມູນ DNA ທີ່ກະແຈກກະຈາຍເກີນ 50 ng, ຂະບວນການເຮັດວຽກທີ່ບໍ່ມີ PCR ສາມາດເລືອກໄດ້ໃນລະຫວ່າງຂັ້ນຕອນການກໍ່ສ້າງຫ້ອງສະຸດ. ຖ້າຈໍານວນສໍາເນົາຂອງຫ້ອງສະຸດຕໍ່າເກີນໄປທີ່ຈະຈັດລໍາດັບໄດ້ໂດຍກົງ, ຫ້ອງສະDNAຸດ DNA ສາມາດຂະຫຍາຍອອກໄດ້ໂດຍ PCR ຫຼັງຈາກການຕິດຕໍ່ອະແດັບເຕີ.

    c) ການປົນເປື້ອນ RNA ນໍາໄປສູ່ການກວດສອບປະລິມານ DNA ເບື້ອງຕົ້ນທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງການປົນເປື້ອນ RNA ອາດຈະມີຢູ່ໃນຂັ້ນຕອນການກັ່ນຕອງ DNA ພັນທຸກໍາ, ເຊິ່ງອາດຈະເຮັດໃຫ້ປະລິມານ DNA ບໍ່ຖືກຕ້ອງແລະການໂຫຼດ DNA ບໍ່ພຽງພໍໃນລະຫວ່າງການສ້າງຫ້ອງສະຸດ. RNA ສາມາດເອົາອອກໄດ້ໂດຍການປິ່ນປົວດ້ວຍ RNase.

    ຖາມ: ຫ້ອງສະDNAຸດ DNA ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນແຖບທີ່ຜິດປົກກະຕິໃນການວິເຄາະ electrophoresis.

    A-1

    ກ) ຊິ້ນສ່ວນຂະ ໜາດ ນ້ອຍ (60 bp-120 bp) ປະກົດວ່າຊິ້ນສ່ວນຂະ ໜາດ ນ້ອຍໂດຍປົກກະຕິແລ້ວເປັນຊິ້ນສ່ວນຂອງອະແດັບເຕີຫຼື dimers ທີ່ສ້າງຂຶ້ນໂດຍຕົວແປງ. ການເຮັດໃຫ້ບໍລິສຸດດ້ວຍລູກປັດສະນະແມ່ເຫຼັກຂອງ Agencourt AMPure XP ສາມາດເອົາຊິ້ນສ່ວນເຄື່ອງປັບເຫຼົ່ານີ້ອອກໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບແລະຮັບປະກັນຄຸນນະພາບການຈັດລໍາດັບ.

    ຂ. ຖ້າຊິ້ນສ່ວນ DNA ເພີ່ມຂຶ້ນຫຼາຍກ່ວາ 120 bp ຫຼັງຈາກການຕໍ່ສາຍອະແດບເຕີ, ມັນອາດຈະເກີດຈາກການຂະຫຍາຍຊິ້ນສ່ວນຜິດປົກກະຕິຂອງການຂະຫຍາຍ PCR ຫຼາຍເກີນໄປ. ການຫຼຸດຜ່ອນຈໍານວນຂອງຮອບວຽນ PCR ສາມາດປ້ອງກັນສະຖານະການໄດ້.

    c) ຂະ ໜາດ ຜິດປົກກະຕິຂອງຊິ້ນສ່ວນ DNA ຂອງຫ້ອງສະafterຸດຫຼັງຈາກການຕໍ່ສາຍໄຟຄວາມຍາວຂອງຕົວດັດແປງໃນຊຸດນີ້ແມ່ນ 60 bp. ເມື່ອສອງສົ້ນຂອງຊິ້ນສ່ວນຖືກເຊື່ອມເຂົ້າກັບອະແດັບເຕີ, ຄວາມຍາວຈະເພີ່ມຂຶ້ນພຽງແຕ່ 120 bp. ເມື່ອໃຊ້ອະແດັບເຕີອື່ນທີ່ບໍ່ໄດ້ສະ ໜອງ ໃຫ້ໂດຍຊຸດນີ້, ກະລຸນາຕິດຕໍ່ຫາຜູ້ສະ ໜອງ ເພື່ອໃຫ້ຂໍ້ມູນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງເຊັ່ນ: ຄວາມຍາວຂອງອະແດັບເຕີ. ກະລຸນາຮັບປະກັນວ່າຂັ້ນຕອນການເຮັດວຽກແລະການດໍາເນີນການທົດລອງປະຕິບັດຕາມຂັ້ນຕອນທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ຢູ່ໃນຄູ່ມື.

    d) ຂະ ໜາດ ຊິ້ນສ່ວນ DNA ຜິດປົກກະຕິກ່ອນການຕໍ່ສາຍສາກເຫດຜົນຂອງບັນຫານີ້ອາດເກີດຈາກສະພາບການປະຕິກິລິຍາຜິດພາດໃນລະຫວ່າງການກະຈາຍ DNA. ເວລາຕິກິຣິຍາທີ່ແຕກຕ່າງກັນຄວນຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການປ້ອນເຂົ້າ DNA ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. ຖ້າການປ້ອນ DNA ຫຼາຍກ່ວາ 10 ng, ພວກເຮົາແນະນໍາໃຫ້ເລືອກເວລາປະຕິກິລິຍາຂອງ 12 ນາທີເປັນເວລາເລີ່ມຕົ້ນສໍາລັບການເພີ່ມປະສິດທິພາບ, ແລະຂະ ໜາດ ຊິ້ນສ່ວນທີ່ຜະລິດອອກມາໃນເວລານີ້ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນຢູ່ໃນຊ່ວງ 300-500 bp. ຜູ້ໃຊ້ສາມາດເພີ່ມຫຼືຫຼຸດຄວາມຍາວຂອງຊິ້ນ DNA ເປັນເວລາ 2-4 ນາທີຕາມຄວາມຕ້ອງການຂອງເຂົາເຈົ້າເອງເພື່ອເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງຊິ້ນ DNA ດ້ວຍຂະ ໜາດ ທີ່ຕ້ອງການ.

    ກ -2

    ກ) ເວລາການກະຈາຍບໍ່ໄດ້ຖືກປັບໃຫ້ເIfາະສົມຖ້າ DNA ທີ່ກະແຈກກະຈາຍມີຂະ ໜາດ ນ້ອຍເກີນໄປຫຼືໃຫຍ່ເກີນໄປ, ກະລຸນາອ້າງອີງເຖິງຂໍ້ແນະນໍາສໍາລັບການເລືອກເວລາການແບ່ງສ່ວນທີ່ໃຫ້ໄວ້ໃນຄໍາແນະນໍາເພື່ອກໍານົດເວລາຕິກິຣິຍາ, ແລະໃຊ້ຈຸດເວລານີ້ເປັນຕົວຄວບຄຸມ, ນອກຈາກນັ້ນຕັ້ງຄ່າ ລະບົບປະຕິກິລິຍາທີ່ຈະຍືດຍາວຫຼືຫຼຸດອອກ 3 ນາທີເພື່ອເຮັດໃຫ້ມີການປັບຕົວທີ່ຖືກຕ້ອງຫຼາຍຂຶ້ນກ່ຽວກັບເວລາການກະຈາຍ.

    ກ -3

    ການກະຈາຍຂະ ໜາດ ຜິດປົກກະຕິຂອງ DNA ຫຼັງຈາກການປິ່ນປົວດ້ວຍການແບ່ງຕົວ

    ກ. ລະລາຍ 5 × Fragmentation Enzyme Mix ນ້ ຳ ຢາກ້ອນ. ເມື່ອລະລາຍແລ້ວ, ໃຫ້ປະສົມນໍ້າຢາໃສ່ສະເlyີກັນໂດຍການຖອດລຸ່ມຂອງທໍ່ຄ່ອຍ gently. ບໍ່ vortex reagent ໄດ້!

    b) ຕົວຢ່າງການປ້ອນ DNA ປະກອບດ້ວຍ EDTA ຫຼືມົນລະພິດອື່ນ De ການເຮັດໃຫ້ທາດໄອອອນເກືອandົດແລະຕົວແທນ chelating ໃນຂັ້ນຕອນການກັ່ນຕອງ DNA ແມ່ນມີຄວາມສໍາຄັນເປັນພິເສດຕໍ່ກັບຜົນສໍາເລັດຂອງການທົດລອງ. ຖ້າ DNA ຖືກລະລາຍໃນ 1 × TE, ໃຊ້ວິທີການທີ່ໃຫ້ໄວ້ໃນຄໍາແນະນໍາເພື່ອປະຕິບັດການແຍກຕົວ. ຖ້າຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ EDTA ຢູ່ໃນການແກ້ໄຂແມ່ນບໍ່ແນ່ນອນ, ຂໍແນະນໍາໃຫ້ເຮັດຄວາມສະອາດ DNA ແລະເຮັດໃຫ້ລະລາຍໃນນໍ້າ deionized ສໍາລັບປະຕິກິລິຍາຕໍ່ມາ.

    c) ປະລິມານ DNA ເບື້ອງຕົ້ນທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງຂະ ໜາດ ຂອງ DNA ທີ່ກະແຈກກະຈາຍແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງຢ່າງໃກ້ຊິດກັບປະລິມານການປ້ອນເຂົ້າ DNA. ກ່ອນການປິ່ນປົວການກະແຈກກະຈາຍ, ປະລິມານທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງ DNA ໂດຍໃຊ້ Qubit, Picogreen ແລະວິທີການອື່ນ other ແມ່ນເປັນສິ່ງຈໍາເປັນເພື່ອກໍານົດຈໍານວນທີ່ແນ່ນອນຂອງ DNA ໃນລະບົບປະຕິກິລິຍາ.

     d) ການກະກຽມລະບົບປະຕິກິລິຍາບໍ່ໄດ້ປະຕິບັດຕາມຄໍາແນະນໍາການກະກຽມລະບົບປະຕິກິລິຍາທີ່ກະແຈກກະຈາຍຕ້ອງດໍາເນີນຢູ່ເທິງນໍ້າກ້ອນຢ່າງເຂັ້ມງວດຕາມຄໍາແນະນໍາ. ເພື່ອຮັບປະກັນຜົນກະທົບທີ່ດີທີ່ສຸດ, ສ່ວນປະກອບຂອງປະຕິກິລິຍາທັງshouldົດຄວນວາງໃສ່ເທິງນໍ້າກ້ອນແລະການກະກຽມລະບົບປະຕິກິລິຍາຄວນດໍາເນີນຫຼັງຈາກຄວາມເຢັນສົມບູນ. ຫຼັງຈາກການກະກຽມສໍາເລັດແລ້ວ, ກະລຸນາຕີຫຼື pipet ປະສົມຢ່າງລະອຽດ. ບໍ່ vortex!

    ຖາມ: ບັນທຶກທີ່ ສຳ ຄັນ ສຳ ລັບຊຸດຫ້ອງສະDNAຸດ DNA ຂອງ TIANSeq DirectFast (Illumina) (4992259/4992260)

    1. ວິທີການປະສົມທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ (vortex, ການສັ່ນສະເທືອນທີ່ຮຸນແຮງ, ແລະອື່ນ)) ຈະເຮັດໃຫ້ເກີດການກະຈາຍຜິດປົກກະຕິຂອງຊິ້ນສ່ວນຂອງຫ້ອງສະຸດ (ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບຕໍ່ໄປນີ້), ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ຄຸນນະພາບຂອງຫ້ອງສະຸດ. ສະນັ້ນ, ເວລາກະກຽມວິທີແກ້ໄຂປະສົມ Fragmentation Mix, ກະລຸນາຄ່ອຍ ​​pip ປີ້ນຂຶ້ນແລະລົງເພື່ອປະສົມ, ຫຼືໃຊ້ປາຍນິ້ວມືປັດແລະປະສົມໃຫ້ເທົ່າກັນ. ຈົ່ງລະມັດລະວັງບໍ່ໃຫ້ປະສົມກັບ vortex.

    excel

    2. DNA ທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດສູງຕ້ອງຖືກ ນຳ ໃຊ້ເຂົ້າໃນການກໍ່ສ້າງຫ້ອງສະຸດ

    integrity ຄວາມສົມບູນຂອງ DNA ດີ: ແຖບ electrophoresis ມີຫຼາຍກວ່າ 30 kb, ໂດຍບໍ່ມີການຫາງ

    ■ OD260/230:> 1.5

    ■ OD260/280: 1.7-1.9

    3. ປະລິມານການປ້ອນ DNA ຕ້ອງຖືກຕ້ອງມັນໄດ້ຖືກແນະນໍາໃຫ້ນໍາໃຊ້ວິທີການ Qubit ແລະ PicoGreen ເພື່ອກໍານົດປະລິມານ DNA, ແທນທີ່ຈະແມ່ນ Nanodrop.

    4. ເນື້ອໃນຂອງ EDTA ຢູ່ໃນວິທີແກ້ໄຂ DNA ຕ້ອງຖືກກໍານົດວ່າ EDTA ມີອິດທິພົນອັນໃຫຍ່ຫຼວງຕໍ່ກັບປະຕິກິລິຍາການແບ່ງສ່ວນ. ຖ້າເນື້ອໃນຂອງ EDTA ສູງ, ການກວດ DNA ຕ້ອງເຮັດໃຫ້ສະອາດກ່ອນການກວດຄັ້ງຕໍ່ໄປ.

    5. ວິທີແກ້ໄຂປະຕິກິລິຍາການກະຈາຍຄວາມຮ້ອນຕ້ອງໄດ້ກະກຽມໄວ້ເທິງນ້ ຳ ກ້ອນຂະບວນການກະຈາຍຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ກັບອຸນຫະພູມແລະເວລາປະຕິກິລິຍາ (ໂດຍສະເພາະຫຼັງຈາກເພີ່ມເຄື່ອງເພີ່ມເຂົ້າໄປ). ເພື່ອຮັບປະກັນຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງເວລາປະຕິກິລິຍາ, ກະລຸນາກຽມລະບົບປະຕິກິລິຍາໃສ່ນໍ້າກ້ອນ.

    6. ເວລາປະຕິກິລິຍາຂອງການແບ່ງສ່ວນຈະຕ້ອງຖືກຕ້ອງເວລາປະຕິກິລິຍາຂອງຂັ້ນຕອນການແບ່ງສ່ວນຈະມີຜົນກະທົບໂດຍກົງຕໍ່ຂະ ໜາດ ຂອງຜະລິດຕະພັນທີ່ເປັນຊິ້ນສ່ວນ, ສະນັ້ນສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ການກະຈາຍຂະ ໜາດ ຂອງຊິ້ນສ່ວນ DNA ໃນຫ້ອງສະຸດ.

    ຖາມ: ບັນທຶກ ສຳ ຄັນ ສຳ ລັບຊຸດຫ້ອງສະTIຸດ RNA ໄວຂອງ TIANSeq (Illumina) (4992375/4992376)

    1. ຕົວຢ່າງປະເພດໃດທີ່ສາມາດໃຊ້ໄດ້ກັບຊຸດນີ້?

    ປະເພດຕົວຢ່າງທີ່ໃຊ້ໄດ້ຂອງຊຸດນີ້ສາມາດເປັນ RNA ທັງorົດຫຼື mRNA ທີ່ບໍລິສຸດດ້ວຍຄວາມສົມບູນຂອງ RNA ດີ. ຖ້າ RNA ທັງisົດຖືກໃຊ້ເພື່ອສ້າງຫ້ອງສະຸດ, ແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ຊຸດການສູນເສຍ rRNA (Cat#4992363/4992364/4992391) ເພື່ອເອົາ rRNA ອອກກ່ອນ.

    2. ຕົວຢ່າງ FFPE ສາມາດນໍາໃຊ້ເພື່ອສ້າງຫ້ອງສະwithຸດດ້ວຍຊຸດນີ້ໄດ້ບໍ?

    mRNA ໃນຕົວຢ່າງ FFPE ຈະຖືກເຊື່ອມໂຊມລົງໃນລະດັບໃດ ໜຶ່ງ, ດ້ວຍຄວາມສົມບູນທີ່ບໍ່ດີ. ເມື່ອໃຊ້ຊຸດນີ້ສໍາລັບການກໍ່ສ້າງຫ້ອງສະຸດ, ແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ເວລາການກະຈາຍໃຫ້ດີທີ່ສຸດ (ຫຍໍ້ເວລາການກະຈາຍຫຼືບໍ່ປະຕິບັດການແບ່ງສ່ວນ).

    3. ການນໍາໃຊ້ຂັ້ນຕອນການຄັດເລືອກຂະ ໜາດ ທີ່ໃຫ້ໄວ້ຢູ່ໃນຄູ່ມືຜະລິດຕະພັນ, ອັນໃດທີ່ອາດຈະເຮັດໃຫ້ພາກສ່ວນທີ່ໃສ່ແລ້ວປະກົດວ່າມີການບ່ຽງເບນເລັກນ້ອຍ?

    ການຄັດເລືອກຂະ ໜາດ ຈະຕ້ອງດໍາເນີນຢ່າງເຂັ້ມງວດຕາມຂັ້ນຕອນການເລືອກຂະ ໜາດ ຢູ່ໃນຄູ່ມືຜະລິດຕະພັນນີ້. ຖ້າມີການບ່ຽງເບນ, ເຫດຜົນອາດຈະແມ່ນວ່າລູກປັດສະນະແມ່ເຫຼັກບໍ່ສົມດຸນກັບອຸນຫະພູມຫ້ອງຫຼືບໍ່ຖືກປະສົມເຂົ້າກັນຢ່າງເຕັມທີ່, ທໍ່ສົ່ງທໍ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງຫຼືແຫຼວຍັງຄົງຢູ່ໃນສ່ວນປາຍ. ມັນໄດ້ຖືກແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ຄໍາແນະນໍາທີ່ມີການດູດຊຶມຕໍ່າສໍາລັບການທົດລອງ.

    4. ການເລືອກຕົວດັດແປງໃນການກໍ່ສ້າງຫ້ອງສະຸດ

    ຊຸດການກໍ່ສ້າງຫ້ອງສະdoesຸດບໍ່ມີຕົວປະສົມນໍ້າຢາ, ແລະແນະ ນຳ ໃຫ້ໃຊ້ຊຸດນີ້ຮ່ວມກັບ TIANSeq ດັດຊະນີດັດຊະນີດ່ຽວ (Illumina) (4992641/4992642/4992378).

    5. QC ຂອງຫ້ອງສະຸດ

    ການກວດຫາປະລິມານໃນຫ້ອງສະຸດ: Qubit ແລະ qPCR ຖືກໃຊ້ເພື່ອ ກຳ ນົດຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງມະຫາຊົນແລະຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ molar ຂອງຫ້ອງສະຸດຕາມ ລຳ ດັບ. ການດໍາເນີນງານແມ່ນສອດຄ່ອງກັບຄູ່ມືຜະລິດຕະພັນຢ່າງເຂັ້ມງວດ. ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງຫ້ອງສະຸດຈະຕອບສະ ໜອງ ໄດ້ຄວາມຮຽກຮ້ອງຕ້ອງການຂອງລໍາດັບ NGS. ການກວດຫາລະດັບການແຈກຢາຍຫ້ອງສະຸດ: ການໃຊ້ Agilent 2100 Bioanalyzer ເພື່ອກວດຫາຂອບເຂດການແຈກຢາຍຫ້ອງສະຸດ.

    6. ການເລືອກcycleາຍເລກຮອບວຽນການຂະຫຍາຍ

    ອີງຕາມຄໍາແນະນໍາ, ຈໍານວນຂອງຮອບວຽນ PCR ແມ່ນ 6-12, ແລະຈໍານວນຂອງຮອບວຽນ PCR ທີ່ຈໍາເປັນຄວນໄດ້ຮັບການຄັດເລືອກອີງຕາມການປ້ອນຕົວຢ່າງ. ຢູ່ໃນຫ້ອງສະຸດທີ່ໃຫ້ຜົນຜະລິດສູງ, ການຂະຫຍາຍຕົວຫຼາຍກວ່າປົກກະຕິເກີດຂື້ນໃນລະດັບແຕກຕ່າງກັນ, ເຊິ່ງສະແດງອອກໂດຍຈຸດສູງສຸດທີ່ໃຫຍ່ກວ່າເລັກນ້ອຍຫຼັງຈາກຈຸດສູງສຸດຂອງຊ່ວງເປົ້າinາຍໃນການກວດພົບ Agilent 2100 Bioanalyzer, ຫຼືຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ Qubit ທີ່ກວດພົບຕໍ່າກວ່າ qPCR. ການຂະຫຍາຍສຽງເລັກນ້ອຍເປັນປະກົດການປົກກະຕິ, ເຊິ່ງບໍ່ມີຜົນຕໍ່ການຈັດລໍາດັບຫ້ອງສະandຸດແລະການວິເຄາະຂໍ້ມູນໃນພາຍຫຼັງ.

    7. ຮວງປະກົດຢູ່ໃນໂປຣໄຟລ detection ການກວດພົບຂອງ Agilent 2100 Bioanalyzer

    ລັກສະນະຂອງຮວງໃນ Agilent 2100 Bioanalyzer ກວດຫາແມ່ນເນື່ອງມາຈາກການແຍກຕົວຢ່າງທີ່ບໍ່ສະໍ່າສະເ,ີ, ບ່ອນທີ່ຈະມີຊິ້ນສ່ວນຫຼາຍຂຶ້ນຢູ່ໃນຂະ ໜາດ ທີ່ແນ່ນອນ, ແລະອັນນີ້ຈະກາຍເປັນທີ່ຈະແຈ້ງຫຼາຍຂຶ້ນຫຼັງຈາກການເສີມ PCR. ໃນກໍລະນີນີ້, ມັນຖືກແນະນໍາໃຫ້ບໍ່ດໍາເນີນການເລືອກຂະ ໜາດ, ieາຍຄວາມວ່າຕັ້ງເງື່ອນໄຂການແບ່ງສ່ວນໃຫ້ເປັນ 94 ° C ເປັນເວລາ 15 ນາທີ, ບ່ອນທີ່ການແຜ່ກະຈາຍຂອງຊິ້ນສ່ວນມີຂະ ໜາດ ນ້ອຍແລະເຂັ້ມຂຸ້ນ, ແລະສາມາດປັບປຸງຄວາມເປັນເອກະພາບກັນໄດ້.

    ຂຽນຂໍ້ຄວາມຂອງເຈົ້າຢູ່ທີ່ນີ້ແລະສົ່ງໃຫ້ພວກເຮົາ

    ປະເພດຜະລິດຕະພັນ

    ສອບຖາມ
    • sns04
    • sns01
    • sns02
    • sns03
    ©ລິຂະສິດ - 2010-2021: ສະຫງວນສິດທັງົດ.
    ກົດ enter ເພື່ອຄົ້ນຫາຫຼື ESC ເພື່ອປິດ