■ສາມາດເຮັດຄວາມສະອາດ RNA ທີ່ມີຄຸນນະພາບສູງໄດ້ຈາກຕົວຢ່າງປະລິມານການຕິດຕາມ, ເຊັ່ນ: ຈຸລັງທີ່ແຍກອອກຈາກຈຸລະພາກ, ເນື້ອເຍື່ອເປັນເສັ້ນໃຍແລະເຊລ.
D ເອກະລັກ DNase I ຫຼຸດຜ່ອນການປົນເປື້ອນ DNA ພັນທຸກໍາ.
NA RNA ທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດສູງແລະພ້ອມທີ່ຈະໃຊ້ແມ່ນເsuitableາະສົມກັບການ ນຳ ໃຊ້ທາງລຸ່ມທີ່ມີຄວາມອ່ອນໄຫວ.
■ບໍ່ມີການສະກັດເອົາສານ phenol/chloroform, ບໍ່ມີ LiCl ແລະhanົນຕົກຂອງເອທານອນ, ບໍ່ຕ້ອງການ centrifugation gradient centrifugation CsCl, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ຂະບວນການປອດໄພແລະເຊື່ອຖືໄດ້.
■ RT-PCR
■ Blot ພາກ ເໜືອ, ຈຸດດ່າງ.
R PCR ເວລາຈິງ.
analysis ການວິເຄາະຊິບ.
■ການກວດ PolyA, ການແປພາສາໃນ vitro, ການວິເຄາະການປ້ອງກັນ RNase ແລະການສ້າງໂມເລກຸນໂມໂນ.
ຜະລິດຕະພັນທັງຫມົດສາມາດໄດ້ຮັບການປັບແຕ່ງສໍາລັບ ODM/OEM. ສໍາລັບລາຍລະອຽດ,ກະລຸນາຄລິກບໍລິການລູກຄ້າ (ODM/OEM)
RNA ທັງofົດຂອງ 1 × 106, 1 × 105, 1 × 104, 1 × 103, 1 × 102, 10 ເຊລ Hela ໄດ້ຖືກສະກັດໂດຍໃຊ້ RNAprep Pure Micro Kit. RT-qPCR ໄດ້ປະຕິບັດໂດຍໃຊ້ຊຸດປະລິມານ qRT-PCR (SYBR Green) ຂອງ TIANGEN. |
A-1 ການວິເຄາະເຊວຫຼືການເຮັດໃຫ້ເປັນເນື້ອດຽວກັນບໍ່ພຽງພໍ
---- ຫຼຸດຜ່ອນການ ນຳ ໃຊ້ຕົວຢ່າງ, ເພີ່ມປະລິມານຂອງ buffer lysis, ເພີ່ມຄວາມເປັນເອກະພາບແລະເວລາ lysis.
A-2 ຈໍານວນຕົວຢ່າງໃຫຍ່ເກີນໄປ
---- ຫຼຸດປະລິມານຕົວຢ່າງທີ່ໃຊ້ຫຼືເພີ່ມປະລິມານຂອງສານກັນບູດ lysis.
A-1 ການວິເຄາະເຊັລຈຸລັງຫຼືການເຮັດເປັນເອກະພາບບໍ່ພຽງພໍ
---- ຫຼຸດຜ່ອນການ ນຳ ໃຊ້ຕົວຢ່າງ, ເພີ່ມປະລິມານຂອງ buffer lysis, ເພີ່ມຄວາມເປັນເອກະພາບແລະເວລາ lysis.
A-2 ຈໍານວນຕົວຢ່າງໃຫຍ່ເກີນໄປ
---- ກະລຸນາອ້າງອີງເຖິງຄວາມສາມາດໃນການປະມວນຜົນສູງສຸດ.
A-3 RNA ບໍ່ໄດ້ຖືກລຶບອອກຈາກຖັນ
---- ຫຼັງຈາກຕື່ມນໍ້າ RNase-Free, ປະມັນໄວ້ປະມານສອງສາມນາທີກ່ອນທີ່ຈະເຮັດເຄື່ອງເປົ່າລົມ.
A-4 ເອທານອນຢູ່ໃນສານສະສົມ
---- ຫຼັງຈາກລ້າງອອກແລ້ວ, ໃຊ້ນໍ້າ centrifuge ອີກເທື່ອ ໜຶ່ງ ແລະເອົາຜ້າກັນເປື້ອນໃຫ້ຫຼາຍເທົ່າທີ່ຈະຫຼາຍໄດ້.
A-5 ສື່ວັດທະນະທໍາເຊນບໍ່ໄດ້ຖືກເອົາອອກໄປົດ
---- ເວລາເກັບກໍາຈຸລັງ, ກະລຸນາກວດໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າໄດ້ເອົາວັດສະດຸວັດທະນະທໍາອອກໃຫ້ຫຼາຍເທົ່າທີ່ຈະຫຼາຍໄດ້.
A-6 ເຊນທີ່ເກັບຮັກສາໄວ້ໃນ RNAstore ບໍ່ໄດ້ຖືກເຮັດໃຫ້ມີເຄື່ອງຈັກ centrifuged ຢ່າງມີປະສິດທິພາບ
---- ຄວາມ ໜາ ແໜ້ນ ຂອງຮ້ານ RNA ແມ່ນຫຼາຍກ່ວາຂະ ໜາດ ກາງຂອງວັດທະນະ ທຳ ຈຸລັງ; ສະນັ້ນຄວນເພີ່ມແຮງແຮງ centrifugal. ມັນໄດ້ຖືກແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ centrifuge ຢູ່ທີ່ 3000x g.
A-7 ເນື້ອໃນ RNA ຕໍ່າແລະຄວາມອຸດົມສົມບູນຢູ່ໃນຕົວຢ່າງ
---- ໃຊ້ຕົວຢ່າງໃນທາງບວກເພື່ອກໍານົດວ່າຜົນຜະລິດຕໍ່າແມ່ນເກີດມາຈາກຕົວຢ່າງ.
A-1 ວັດສະດຸບໍ່ໃfresh່
---- ເນື້ອເຍື່ອສົດຄວນເກັບຮັກສາໄວ້ໃນໄນໂຕຣເຈນແຫຼວໃນທັນທີຫຼືໃສ່ເຂົ້າໄປໃນນໍ້າຢາ RNAstore ທັນທີເພື່ອຮັບປະກັນຜົນຂອງການສະກັດເອົາ.
A-2 ຈໍານວນຕົວຢ່າງໃຫຍ່ເກີນໄປ
---- ຫຼຸດ ຈຳ ນວນຕົວຢ່າງລົງ.
ການປົນເປື້ອນຂອງ A-3 RNasen
---- ເຖິງແມ່ນວ່າບັຟເຟີທີ່ສະ ໜອງ ໃຫ້ໃນຊຸດບໍ່ມີ RNase, ມັນງ່າຍທີ່ຈະປົນເປື້ອນ RNase ໃນລະຫວ່າງຂັ້ນຕອນການສະກັດເອົາແລະຄວນຈັດການດ້ວຍຄວາມລະມັດລະວັງ.
A-4 ມົນລະພິດດ້ວຍໄຟຟ້າ
---- ແທນທີ່ electrophoresis buffer ແລະໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າເຄື່ອງບໍລິໂພກແລະ Loading Buffer ແມ່ນບໍ່ມີການປົນເປື້ອນຂອງ RNase.
A-5 ການໂຫຼດໄຟຟ້າຫຼາຍເກີນໄປ
---- ຫຼຸດປະລິມານການໂຫຼດຕົວຢ່າງລົງ, ການໂຫຼດນໍ້າສ້າງແຕ່ລະອັນບໍ່ຄວນເກີນ 2 μg.
A-1 ຈໍານວນຕົວຢ່າງໃຫຍ່ເກີນໄປ
---- ຫຼຸດ ຈຳ ນວນຕົວຢ່າງລົງ.
A-2 ບາງຕົວຢ່າງມີເນື້ອໃນ DNA ສູງແລະສາມາດປິ່ນປົວດ້ວຍ DNase.
---- ປະຕິບັດການປິ່ນປົວ DNase ທີ່ບໍ່ມີ RNase ໃຫ້ກັບການແກ້ໄຂ RNA ທີ່ໄດ້ຮັບ, ແລະ RNA ສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ໂດຍກົງສໍາລັບການທົດລອງຕໍ່ໄປຫຼັງຈາກການປິ່ນປົວ, ຫຼືສາມາດເຮັດໃຫ້ບໍລິສຸດຕື່ມໄດ້ໂດຍຊຸດເຄື່ອງກັ່ນຕອງ RNA.
ສຳ ລັບແກ້ວແກ້ວ, ອົບທີ່ 150 ° C ເປັນເວລາ 4 ຊົ່ວໂມງ. ສຳ ລັບພາຊະນະພາດສະຕິກ, inັງຢູ່ໃນ 0.5 M NaOH ເປັນເວລາ 10 ນາທີ, ຈາກນັ້ນລ້າງອອກດ້ວຍນໍ້າ RNase ທີ່ບໍ່ເສຍຄ່າຢ່າງລະອຽດແລະຫຼັງຈາກນັ້ນຂ້າເຊື້ອເພື່ອເອົາ RNase ອອກcompletelyົດ. ນ້ ຳ ຢາຫຼືວິທີແກ້ບັນຫາທີ່ໃຊ້ໃນການທົດລອງ, ໂດຍສະເພາະນ້ ຳ, ຕ້ອງບໍ່ມີສານ RNase. ໃຊ້ນໍ້າທີ່ບໍ່ມີສານ RNase ສໍາລັບການກະກຽມນໍ້າຢາທັງ(ົດ (ເພີ່ມນໍ້າໃສ່ຂວດແກ້ວທີ່ສະອາດ, ຕື່ມ DEPC ໃສ່ໃນຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນສຸດທ້າຍ 0.1% (V/V), ສັ່ນຂ້າມຄືນແລະອັດລົມອັດຕະໂນມັດ).
ນັບຕັ້ງແຕ່ການສ້າງຕັ້ງ, ໂຮງງານຂອງພວກເຮົາໄດ້ພັດທະນາຜະລິດຕະພັນລະດັບໂລກອັນທໍາອິດໂດຍຍຶດັ້ນຫຼັກການ
ຂອງຄຸນນະພາບຄັ້ງທໍາອິດ. ຜະລິດຕະພັນຂອງພວກເຮົາໄດ້ຮັບຊື່ສຽງໂດ່ງດັງໃນອຸດສາຫະກໍາແລະເປັນທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ໃນບັນດາລູກຄ້າໃand່ແລະເກົ່າ.