ຊຸດ RNAclean

A-1 ການວິເຄາະເຊວຫຼືການເຮັດໃຫ້ເປັນເນື້ອດຽວກັນບໍ່ພຽງພໍ

---- ຫຼຸດຜ່ອນການ ນຳ ໃຊ້ຕົວຢ່າງ, ເພີ່ມປະລິມານຂອງ buffer lysis, ເພີ່ມຄວາມເປັນເອກະພາບແລະເວລາ lysis.

A-2 ຈໍານວນຕົວຢ່າງໃຫຍ່ເກີນໄປ

---- ຫຼຸດປະລິມານຕົວຢ່າງທີ່ໃຊ້ຫຼືເພີ່ມປະລິມານຂອງສານກັນບູດ lysis.

A-1 ການວິເຄາະເຊັລຈຸລັງຫຼືການເຮັດເປັນເອກະພາບບໍ່ພຽງພໍ

---- ຫຼຸດຜ່ອນການ ນຳ ໃຊ້ຕົວຢ່າງ, ເພີ່ມປະລິມານຂອງ buffer lysis, ເພີ່ມຄວາມເປັນເອກະພາບແລະເວລາ lysis.

A-2 ຈໍານວນຕົວຢ່າງໃຫຍ່ເກີນໄປ

---- ກະລຸນາອ້າງອີງເຖິງຄວາມສາມາດໃນການປະມວນຜົນສູງສຸດ.

A-3 RNA ບໍ່ໄດ້ຖືກລຶບອອກຈາກຖັນ

---- ຫຼັງຈາກຕື່ມນໍ້າ RNase-Free, ປະມັນໄວ້ປະມານສອງສາມນາທີກ່ອນທີ່ຈະເຮັດເຄື່ອງເປົ່າລົມ.

A-4 ເອທານອນຢູ່ໃນສານສະສົມ

---- ຫຼັງຈາກລ້າງອອກແລ້ວ, ໃຊ້ນໍ້າ centrifuge ອີກເທື່ອ ໜຶ່ງ ແລະເອົາຜ້າກັນເປື້ອນໃຫ້ຫຼາຍເທົ່າທີ່ຈະຫຼາຍໄດ້.

A-5 ສື່ວັດທະນະທໍາເຊນບໍ່ໄດ້ຖືກເອົາອອກໄປົດ

---- ເວລາເກັບກໍາຈຸລັງ, ກະລຸນາກວດໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າໄດ້ເອົາວັດສະດຸວັດທະນະທໍາອອກໃຫ້ຫຼາຍເທົ່າທີ່ຈະຫຼາຍໄດ້.

A-6 ເຊນທີ່ເກັບຮັກສາໄວ້ໃນ RNAstore ບໍ່ໄດ້ຖືກເຮັດໃຫ້ມີເຄື່ອງຈັກ centrifuged ຢ່າງມີປະສິດທິພາບ

---- ຄວາມ ໜາ ແໜ້ນ ຂອງຮ້ານ RNA ແມ່ນຫຼາຍກ່ວາຂະ ໜາດ ກາງຂອງວັດທະນະ ທຳ ຈຸລັງ; ສະນັ້ນຄວນເພີ່ມແຮງແຮງ centrifugal. ມັນໄດ້ຖືກແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ centrifuge ຢູ່ທີ່ 3000x g.

A-7 ເນື້ອໃນ RNA ຕໍ່າແລະຄວາມອຸດົມສົມບູນຢູ່ໃນຕົວຢ່າງ

---- ໃຊ້ຕົວຢ່າງໃນທາງບວກເພື່ອກໍານົດວ່າຜົນຜະລິດຕໍ່າແມ່ນເກີດມາຈາກຕົວຢ່າງ.

A-1 ວັດສະດຸບໍ່ໃfresh່

---- ເນື້ອເຍື່ອສົດຄວນເກັບຮັກສາໄວ້ໃນໄນໂຕຣເຈນແຫຼວໃນທັນທີຫຼືໃສ່ເຂົ້າໄປໃນນໍ້າຢາ RNAstore ທັນທີເພື່ອຮັບປະກັນຜົນຂອງການສະກັດເອົາ.

A-2 ຈໍານວນຕົວຢ່າງໃຫຍ່ເກີນໄປ

---- ຫຼຸດ ຈຳ ນວນຕົວຢ່າງລົງ.

ການປົນເປື້ອນຂອງ A-3 RNasen

---- ເຖິງແມ່ນວ່າບັຟເຟີທີ່ສະ ໜອງ ໃຫ້ໃນຊຸດບໍ່ມີ RNase, ມັນງ່າຍທີ່ຈະປົນເປື້ອນ RNase ໃນລະຫວ່າງຂັ້ນຕອນການສະກັດເອົາແລະຄວນຈັດການດ້ວຍຄວາມລະມັດລະວັງ.

A-4 ມົນລະພິດດ້ວຍໄຟຟ້າ

---- ແທນທີ່ electrophoresis buffer ແລະໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າເຄື່ອງບໍລິໂພກແລະ Loading Buffer ແມ່ນບໍ່ມີການປົນເປື້ອນຂອງ RNase.

A-5 ການໂຫຼດໄຟຟ້າຫຼາຍເກີນໄປ

---- ຫຼຸດປະລິມານການໂຫຼດຕົວຢ່າງລົງ, ການໂຫຼດນໍ້າສ້າງແຕ່ລະອັນບໍ່ຄວນເກີນ 2 μg.

A-1 ຈໍານວນຕົວຢ່າງໃຫຍ່ເກີນໄປ

---- ຫຼຸດ ຈຳ ນວນຕົວຢ່າງລົງ.

A-2 ບາງຕົວຢ່າງມີເນື້ອໃນ DNA ສູງແລະສາມາດປິ່ນປົວດ້ວຍ DNase.

---- ປະຕິບັດການປິ່ນປົວ DNase ທີ່ບໍ່ມີ RNase ໃຫ້ກັບການແກ້ໄຂ RNA ທີ່ໄດ້ຮັບ, ແລະ RNA ສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ໂດຍກົງສໍາລັບການທົດລອງຕໍ່ໄປຫຼັງຈາກການປິ່ນປົວ, ຫຼືສາມາດເຮັດໃຫ້ບໍລິສຸດຕື່ມໄດ້ໂດຍຊຸດເຄື່ອງກັ່ນຕອງ RNA.

ສຳ ລັບແກ້ວແກ້ວ, ອົບທີ່ 150 ° C ເປັນເວລາ 4 ຊົ່ວໂມງ. ສຳ ລັບພາຊະນະພາດສະຕິກ, inັງຢູ່ໃນ 0.5 M NaOH ເປັນເວລາ 10 ນາທີ, ຈາກນັ້ນລ້າງອອກດ້ວຍນໍ້າ RNase ທີ່ບໍ່ເສຍຄ່າຢ່າງລະອຽດແລະຫຼັງຈາກນັ້ນຂ້າເຊື້ອເພື່ອເອົາ RNase ອອກcompletelyົດ. ນ້ ຳ ຢາຫຼືວິທີແກ້ບັນຫາທີ່ໃຊ້ໃນການທົດລອງ, ໂດຍສະເພາະນ້ ຳ, ຕ້ອງບໍ່ມີສານ RNase. ໃຊ້ນໍ້າທີ່ບໍ່ມີສານ RNase ສໍາລັບການກະກຽມນໍ້າຢາທັງ(ົດ (ເພີ່ມນໍ້າໃສ່ຂວດແກ້ວທີ່ສະອາດ, ຕື່ມ DEPC ໃສ່ໃນຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນສຸດທ້າຍ 0.1% (V/V), ສັ່ນຂ້າມຄືນແລະອັດລົມອັດຕະໂນມັດ).